Агар для селективного выделения и идентификации Cryptococcus neoformans HiMedia M563-100G (уп/100 гр)

Диагностический дифференциальный агар для селективного выделения и идентификации Cryptococcus neoformans HiMedia M563-100G (уп/100 гр) с добавлением кофейной кислоты и цитрата железа. Применяется для предварительной идентификации Cryptococcus neoformans и дифференциации от других видов, при этом возможно появление ложноотрицательных реакций и задержка образования пигмента при обильном росте.

Назначение

Агар HiMedia M563-100G, также обозначаемый как кофеиново-кислый агар с цитратом железа (CAFC-среда), предназначен для селективного выделения и предварительной идентификации Cryptococcus neoformans, а также его дифференциации от других видов Cryptococcus.

Тип питательной среды: диагностическая, дифференциальная.
Назначение изделия: агар.
Сертификат: ФСЗ 2009/03709.
Форма выпуска: порошок.
Масса упаковки: 100 г.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Конечный pH при 25 °C: 6,5 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация

Cryptococcus neoformans — инкапсулированный дрожжеподобный гриб, относящийся к базидиомицетам. C. neoformans связан преимущественно с местами обитания птиц и выделяется из почвы, загрязнённой птичьим помётом. Микроорганизм вызывает заболевания как у пациентов с сохранным иммунитетом, так и у пациентов с иммунодефицитом; наиболее восприимчивы пациенты с дефицитом T-клеток. C. neoformans является одной из наиболее частых причин жизнеугрожающих инфекций у пациентов со СПИДом.

Кофейново-кислый агар с цитратом железа используют для быстрой идентификации и дифференциации C. neoformans от других видов Cryptococcus. Среда содержит кофейную кислоту, которая действует как селективный компонент для C. neoformans. Кофейная кислота является соединением с двумя соседними фенольными гидроксильными группами и может окисляться ферментом фенолоксидазой с образованием тёмно-коричневой меланиновой пигментации.

C. neoformans обладает способностью образовывать меланин или меланиноподобный пигмент из пара- и орто-дифенолов, благодаря чему может быть дифференцирован от Candida albicans. В присутствии цитрата железа кофейная кислота вызывает образование пигмента у C. neoformans.

Функции компонентов среды:

• декстроза — сбраживаемый углевод;
• дрожжевой экстракт — источник азотистых питательных веществ и витаминов группы B;
• сульфаты и фосфат — компоненты буферной системы среды;
• цитрат железа — участвует в образовании пигмента C. neoformans в присутствии кофейной кислоты;
• хлорамфеникол, если он добавлен, подавляет сопутствующую бактериальную флору.

Рост C. neoformans на этой среде следует сравнивать с ростом того же микроорганизма на другой среде до посева, чтобы определить, не обусловлена ли пигментация колоний природными свойствами культуры. Возможны ложноотрицательные реакции. При обильном росте образование пигмента задерживается. Другие криптококки могут становиться пигментированными через 3–4 дня после посева, однако их окраска менее интенсивна, что позволяет отличать такие культуры от C. neoformans.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 33,7 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов, ориентировочно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. При необходимости в асептических условиях добавьте стерильный раствор хлорамфеникола до конечной концентрации 50 мкг/мл среды.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Тип образца

• клинические образцы тканей;
• биологические жидкости;
• образцы мокроты.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом в соответствии с установленными лабораторными процедурами и руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед вскрытием контейнера изучите маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения метода

1. Рост C. neoformans на этой среде следует сравнивать с ростом того же микроорганизма на другой среде до посева, чтобы определить, не является ли пигментация колоний природной.
2. При обильном росте образование пигмента задерживается.
3. Возможны ложноотрицательные реакции.
4. Другие криптококки могут приобретать пигментацию через 3–4 дня после посева; их окраска обычно менее интенсивна, чем у C. neoformans.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 2,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель янтарного цвета с фиолетовым оттенком.

Реакция среды

Реакция водного раствора с массовой концентрацией 3,37 % при 25 °C: pH 6,5 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,30–6,70.

Культуральные характеристики

Характеристики определяют после инкубации при 25–30 °C в течение 24–48 ч на среде с добавлением хлорамфеникола в концентрации 50 мкг/мл.

* Соответствующие номера WDCM.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения нераскрытого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения: в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения приготовленной среды: 15–30 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия плотно закрывайте контейнер и храните продукт в сухом состоянии.
• Порошок обладает гигроскопичностью; при попадании влаги возможно образование комков.
• Неправильное хранение может привести к комкованию продукта.
• Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников возгорания.
• После каждого использования контейнер необходимо плотно закрывать.
• Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в пределах установленного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте действующие лабораторные процедуры. Материал, контактировавший с клиническими образцами, должен быть обеззаражен и утилизирован в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Технические характеристики