HiMedia M537-100G Основа среды Лёффлера

Основа питательной среды HiMedia M537-100G Основа среды Лёффлера — сухой порошковый препарат животного происхождения для приготовления среды с добавлением лошадиной сыворотки. Основа предназначена для культивирования Corynebacterium diphtheriae из клинических образцов и чистых культур, а также для выявления хромогенеза, протеолиза и образования аскоспор; для приготовления среды требуется 750 мл стерильной лошадиной сыворотки на 8,75 г основы в 250 мл воды.

Назначение

Основа среды Лёффлера рекомендована для:

• культивирования Corynebacterium diphtheriae из клинических образцов и чистых культур;
• первичного и вторичного выделения и культивирования требовательных патогенных микроорганизмов, особенно из образцов, взятых из носа и зева;
• восстановления вирулентности и других идентификационных свойств микроорганизмов, включая микроскопические и культуральные признаки, утраченных вследствие длительной инкубации или многократных пересевов;
• определения протеолитической активности микроорганизмов;
• выявления пигментации и аскоспор;
• определения хромогенеза.

Высокое содержание сыворотки способствует определению протеолитической активности. Среду Лёффлера следует использовать параллельно с сывороточным теллуритовым агаром для селективного выделения Corynebacteria.

Состав

Содержание компонентов рассчитано на 1 л:

• Эквивалент: экстракт говядины.
• Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.
• Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных эксплуатационных характеристик.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 8,75 г основы в 250 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при 115 °C в течение 20 мин. Обозначение A соответствует давлению 10 фунтов; ориентировочно это ≈0,069 МПа.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 750 мл стерильной лошадиной сыворотки RM1239.
6. Тщательно перемешайте.
7. В асептических условиях разлейте среду в стерильные пробирки.
8. Проведите стерилизацию среды методом инсписсации: выдерживайте при 80–85 °C в течение 2 ч в свободно проходящем паре не менее 3 последовательных дней.

Принцип и интерпретация

Среда Лёффлера была первоначально разработана Лёффлером и позднее модифицирована Перри и Петраном, а также Баком. Специальный пептон и пептон HM B обеспечивают микроорганизмы необходимыми питательными веществами. Декстроза служит источником сбраживаемого углевода и энергии.

Для исследования мазок непосредственно втирают в поверхность среды. После инкубации из поверхностной части скоса готовят мазки.

Для определения протеолиза:

1. Инокулируйте скос среды.
2. До инкубации залейте скос тиогликолевой средой Брюера (M019).
3. Инкубируйте посев в течение 3–4 суток или значительно дольше — до появления признаков протеолиза.

Тип образца

Клинические образцы:

• мазки из носоглотки;
• мазки из зева.

Взятие и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами применяйте соответствующие методы обращения с материалом в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления 750 мл лошадиной сыворотки и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Основа: прозрачный или слегка опалесцирующий раствор светло-янтарного цвета.
• После добавления лошадиной сыворотки: непрозрачный раствор грязно-белого цвета.

Реакция

Реакция водного раствора основы с концентрацией 3,52 % масс./об. при 25 °C:

• pH: 7,3 ± 0,2.

Диапазон pH

7,10–7,50.

Ограничения применения

Для оптимального восстановления C. diphtheriae мазок из носоглотки и мазок из зева следует получать при взятии образца.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения нераскрытого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок применения: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде.
• Основа обладает гигроскопичностью; при попадании влаги и ненадлежащем хранении возможно образование комков.
• Место хранения: сухая проветриваемая зона, защищённая от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования контейнер следует плотно закрывать.
• Рабочие характеристики среды сохраняются при применении в течение указанного срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Меры предосторожности

• Для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила микробиологической лабораторной практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо безопасно утилизировать с помощью автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов следует соблюдать установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Технические характеристики

• Артикул: M537-100G.
• Назначение изделия: основа.
• Масса: 100 г.
• Температура хранения: 10–30 °C.

Связанные реагенты и среды

• Лошадиная сыворотка RM1239 — добавляется в объёме 750 мл на 8,75 г основы.
• Тиогликолевая среда Брюера M019 — используется для исследования протеолиза.
• Сывороточный теллуритовый агар — используется параллельно со сред