Минимальный агар HiMedia M512-500G (уп/500 гр)

Минимальный агар HiMedia M512-500G (уп/500 гр) — химически определённая питательная среда в форме порошка с конечным pH 7,0 ± 0,2. Минимальный агар применяется для культивирования и выделения пищевых мутантов Escherichia coli и Bacillus subtilis с добавлением необходимых аминокислот, витаминов, нуклеиновых кислот или других факторов роста.

Назначение

Минимальный агар используют для изучения потребностей микроорганизмов в питательных веществах, скрининга и выделения пищевых мутантов. Среда может дополняться требуемыми факторами роста в зависимости от исследуемого признака: аминокислотами, витаминами, нуклеиновыми кислотами и другими веществами.

Регистрационные данные: ФСЗ 2009/03707
Назначение изделия: агар

Состав

Состав рассчитан и стандартизирован для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2

Принцип действия и интерпретация

Пищевые мутанты Escherichia coli, полученные воздействием ультрафиолетового излучения на исходные штаммы E. coli, нуждаются для роста в полноценной питательной среде. Минимальные среды могут дополняться необходимыми компонентами для изучения пищевых свойств мутантов.

Минимальные среды представляют собой составы Дэвиса, описанные Ледербергом. Такие среды содержат только необходимые питательные вещества для роста исходных штаммов E. coli. Пищевые мутанты, полученные из облучённых культур исходных штаммов E. coli, могут выделяться методом случайной изоляции, описанным Ледербергом. Также мутанты могут выделяться с применением пенициллина по методике Дэвиса и Ледерберга. Мутанты Bacillus subtilis могут выделяться с использованием этих методик, а также методом с применением пенициллина, описанным Нестером и соавторами.

Декстроза служит источником энергии. Дикалийфосфат и монокалийфосфат обеспечивают буферные свойства среды. Сульфат магния и сульфат аммония являются источниками ионов, имитирующих процессы метаболизма.

К минимальной среде добавляют питательные компоненты в зависимости от типа исследуемого мутанта. В качестве добавок могут использоваться аминокислоты, витамины, нуклеиновые кислоты и другие вещества. Для этого применяют казаминовые кислоты для определения витаминов с триптофаном, смесь водорастворимых витаминов, дрожжевые экстракты или экстракты нуклеиновых кислот.

Схема выделения мутантов

1. Суспензию клеток исходного штамма E. coli подвергают ультрафиолетовому облучению.
2. Облучённую суспензию культивируют на минимальном агаре с добавлением всех необходимых для роста компонентов. Это обеспечивает рост как исходных клеток — прототрофов, так и мутантных клеток.
3. Отобранные колонии переносят в минимальный бульон Дэвиса (M389) и в минимальный бульон Дэвиса с добавлением необходимых факторов роста.
4. Культуры инкубируют при 35 °C в течение 24 ч.
5. Рост в минимальном бульоне с добавленными факторами роста при отсутствии роста в минимальном бульоне без добавок указывает на наличие мутанта, дефектного по соответствующему фактору.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 26,6 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов, ориентировочно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Тщательно перемешайте приготовленную среду.
5. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Контроль качества

Внешний вид порошка: однородный сыпучий порошок от не совсем белого до бежевого цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с гелем 1,5 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель янтарного цвета.

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 2,6 % масс./об. при 25 °C.

pH: 7,0 ± 0,2

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

Условия хранения и срок годности

Температура хранения сухой среды: ниже 30 °C.

Условия хранения: в плотно закрытой ёмкости.

Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.

Срок применения: до даты истечения срока годности, указанной на этикетке.