Минимальный агар HiMedia M512-500G (уп/500 гр)

Сухая питательная среда Минимальный агар HiMedia M512-500G (уп/500 г) производства HiMedia. Представляет собой химически определенную среду, предназначенную для выделения и изучения нутриентных мутантов Escherichia coli и Bacillus subtilis.

Принцип работы и интерпретация

Минимальный агар содержит только необходимые питательные вещества для роста штаммов Escherichia coli дикого типа. Нутриентные мутанты E. coli, полученные путем воздействия ультрафиолетового излучения на дикий тип, требуют полноценной питательной среды для роста. Данная среда может быть дополнена необходимыми добавками для изучения трофических характеристик мутантов.

Формула среды основана на рецептуре Дэвиса и Ледерберга. Изоляция нутриентных мутантов из облученных культур дикого типа E. coli осуществляется методом случайной изоляции или с использованием пенициллина. Аналогичные методы применимы для изоляции мутантов Bacillus subtilis.

Роль компонентов:

• Декстроза: источник энергии.
• Гидрофосфат калия и дигидрофосфат калия: обеспечивают буферизацию среды.
• Сульфат магния и сульфат аммония: источники ионов, имитирующих метаболические процессы.

Тип добавляемых добавок (аминокислоты, витамины, нуклеиновые кислоты или другие вещества) зависит от типа скринируемого мутанта. Это может быть реализовано путем добавления казеиновых аминокислот с триптофаном, смеси водорастворимых витаминов, дрожжевых или нуклеиновых экстрактов.

Методика анализа

1. Клеточную суспензию E. coli дикого типа облучают и культивируют на минимальном агаре, дополненном всеми необходимыми требованиями к росту. Это обеспечивает рост как клеток дикого типа (прототрофов), так и мутантных клеток.
2. Отобранные колонии переносят в минимальный бульон Дэвиса (M389) и в минимальный бульон Дэвиса, дополненный специфическими требованиями к росту.
3. Инкубируют при температуре 35 °C в течение 24 часов.
4. Рост в дополненном бульоне при отсутствии роста в обычном минимальном бульоне указывает на наличие мутанта по данному конкретному фактору.

Приготовление и стерилизация

1. Растворить 26,6 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Физико-химические параметры

• Конечный pH (при 25 °C): 7,0 $\pm$ 0,2
• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от белого до бежевого цвета
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5% агаровым гелем
• Цвет и прозрачность готовой среды: прозрачный или слегка опалесцирующий гель янтарного цвета

Спецификации

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре ниже 30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.

Дополнительная информация

• Сертификат: ФСЗ 2009/03707.
• Назначение: используется в микробиологических исследованиях для селекции нутриентных мутантов.