HiMedia M512-100G Минимальный агар

Питательная среда HiMedia M512-100G Минимальный агар — химически определяемая порошкообразная среда для культивирования микроорганизмов. Применяется для выделения и изучения ауксотрофных мутантов Escherichia coli и Bacillus subtilis; готовая среда имеет pH 7,0 ± 0,2 при 25 °C и хранится при 2–8 °C.

Назначение

Минимальный агар используют для культивирования прототрофных и ауксотрофных мутантов микроорганизмов, включая Escherichia coli и Bacillus subtilis. Минимальная среда содержит только необходимые питательные вещества для роста диких штаммов Escherichia coli и может дополняться аминокислотами, витаминами, нуклеиновыми кислотами и другими соединениями в зависимости от исследуемого питательного признака мутанта.

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована под параметры эффективности.

Принцип действия и интерпретация

Питательные мутанты Escherichia coli, полученные воздействием ультрафиолетового света на дикие клетки E. coli, нуждаются для роста в полноценной по питательным веществам среде. Минимальные среды можно дополнять необходимыми компонентами для изучения питательных свойств мутантов.

Минимальные среды представляют собой составы Davis, описанные Lederberg. Такие среды содержат только необходимые питательные вещества для роста диких штаммов E. coli. Ауксотрофные мутанты, полученные из облучённых культур диких штаммов E. coli, могут быть выделены методом случайного выделения, описанным Lederberg. Мутанты также выделяют с использованием пенициллина по методике Davis и Lederberg. Мутанты Bacillus subtilis могут быть выделены с применением этих методов, а также методом с использованием пенициллина, описанным Nester и соавторами.

Функции компонентов среды:

• Декстроза: источник энергии.
• Дикалийфосфат и монокалийфосфат: буферные компоненты среды.
• Сульфат магния и сульфат аммония: источники ионов, участвующих в обеспечении условий для метаболизма.

Набор питательных добавок к минимальной среде выбирают в зависимости от типа выявляемого мутанта. В состав добавок могут входить аминокислоты, витамины, нуклеиновые кислоты и другие вещества. Для этого используют казаминовые кислоты для определения витаминов с триптофаном, смесь водорастворимых витаминов, дрожжевой экстракт или экстракты нуклеиновых кислот.

Методика выделения и идентификации мутантов

1. Суспензию клеток дикого типа E. coli подвергают ультрафиолетовому облучению.
2. Облучённую суспензию культивируют на минимальном агаре с добавлением всех необходимых для роста компонентов.
3. При таких условиях получают рост как диких клеток — прототрофов, так и клеток-мутантов.
4. Отобранные колонии переносят в минимальный бульон Davis (M389), а также в минимальный бульон Davis с добавлением необходимых факторов роста.
5. Инкубируют при 35 °C в течение 24 ч.
6. Рост в минимальном бульоне с добавленными факторами роста при отсутствии роста в минимальном бульоне без добавок указывает на мутацию по соответствующему питательному фактору.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 26,6 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Тщательно перемешайте приготовленную среду.
5. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от серовато-белого до бежевого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель янтарного цвета.

Реакция среды

Реакция: реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 2,6 % при 25 °C.

pH: 7,0 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяли после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

• Назначение изделия: агар.
• Масса: 100 г.
• Код среды: M512.
• Температура хранения сухой среды: ниже 30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Температура хранения по данным каталога: 10–30 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.

Хранение

Храните сухую среду в плотно закрытом контейнере при температуре ниже 30 °C. Приготовленную среду храните при 2–8 °C. Используйте продукт до истечения срока годности, указанного на этикетке.

Сравнительное отличие

В отличие от полноценных питательных сред, минимальный агар содержит только необходимые питательные вещества и допускает адресное добавление факторов роста для выявления потребности мутантов в определённых аминокислотах, витаминах или других соединениях.