HiMedia M512-100G Минимальный агар

Сухая питательная среда HiMedia M512-100G Минимальный агар с химически определенным составом. Применяется для выделения и изучения нутриентных мутантов Escherichia coli и Bacillus subtilis, а также для анализа их трофических потребностей.

Принцип работы и интерпретация

Минимальный агар основан на рецептурах Дэвиса и Ледерберга. Среда содержит минимальный набор питательных веществ, необходимых для роста штаммов Escherichia coli дикого типа (прототрофов). Нутриентные мутанты, полученные путем облучения дикого типа ультрафиолетом, требуют для роста дополнительных компонентов (аминокислот, витаминов, нуклеиновых кислот), что позволяет использовать данную среду для их селекции и изучения.

Роль компонентов

• Декстроза: источник энергии.
• Гидрофосфат калия и дигидрофосфат калия: обеспечивают буферную емкость среды.
• Сульфат магния и сульфат аммония: источники ионов, имитирующих метаболические процессы.

Методика анализа и скрининга мутантов

1. Суспензию клеток E. coli дикого типа облучают и культивируют на минимальном агаре, дополненном всеми необходимыми факторами роста. Это обеспечивает рост как прототрофов, так и мутантных клеток.
2. Отобранные колонии переносят в минимальный бульон Дэвиса (M389) и в минимальный бульон Дэвиса, дополненный конкретными факторами роста.
3. Инкубируют при 35 °C в течение 24 часов.
4. Результат: рост в бульоне с добавками при отсутствии роста в чистом минимальном бульоне указывает на наличие мутации по конкретному фактору.

В зависимости от типа искомого мутанта, в среду могут вноситься добавки: казеиновые аминокислоты с триптофаном, смесь водорастворимых витаминов, экстракты дрожжей или нуклеиновых кислот.

Состав

Состав, г/л:

Конечный pH (при 25 °C): 7,0 ± 0,2.

Приготовление и стерилизация

1. Растворить 26,6 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагревать до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Технические характеристики

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободнотекущий порошок от почти белого до бежевого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5% агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: прозрачный или слегка опалесцирующий гель янтарного цвета.
• Реакция: pH 2,6% (масса/объем) водного раствора при 25 °C составляет 7,0 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре ниже 30 °C.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.