HiMedia M502-100G Агар для тестирования диагностической чувствительности

Питательная агаровая среда HiMedia M502-100G Агар для тестирования диагностической чувствительности производства HiMedia предназначена для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и содержит 100 г сухой среды. Среда применяется для требовательных патогенов, включая виды Neisseria, Streptococcus и Haemophilus, при обогащении кровью; для менее требовательных микроорганизмов может использоваться без крови.

Назначение и область применения

Diagnostic Sensitivity Test Agar (D.S.T. Agar), или агар для тестирования диагностической чувствительности, используется как питательная среда для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам, включая сульфаниламиды.

Среда предназначена для работы с требовательными патогенами, такими как виды Neisseria, Streptococcus и Haemophilus, при обогащении кровью клинических образцов.

Для менее требовательных микроорганизмов — Micrococci, Salmonella, Shigella, колиформных бактерий и видов Proteus — среда может использоваться без добавления крови. Для требовательных микроорганизмов, включая Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis, альфа- и бета-гемолитические стрептококки, необходимо обогащение кровью.

Среда не предназначена для использования в качестве первичной изолирующей среды, поскольку обладает пониженной активностью тимидина.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих характеристик. Сухие вещества настоя HMV эквивалентны сухим веществам настоя телятины.

Конечный показатель pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 43,04 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Для приготовления кровяного агара охладите основу до 45–50 °C.
5. Асептически добавьте 7 % об./об. стерильной дефибринированной крови лошади.
6. Тщательно перемешайте осторожным вращением.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Диагностический агар для тестирования чувствительности применяется для диагностики и определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам, включая сульфаниламиды. Отсутствие интерферирующих веществ способствует формированию чётко выраженных зон задержки роста.

Питательные свойства среды обусловлены наличием аминокислотных оснований и глюкозы. Присутствующие соли предотвращают резкие сдвиги pH, вызываемые образованием кислот, которые могут влиять на результаты теста чувствительности, гемолитические реакции и значения минимальной ингибирующей концентрации антимикробных препаратов, чувствительных к pH.

Аневрин служит источником витамина и улучшает рост ряда микроорганизмов, особенно стафилококков. Агар, используемый в составе, специально обработан для беспрепятственной диффузии антимикробных препаратов из дисков. Добавление аденина, гуанина, урацила и ксантина улучшает рабочие характеристики среды при антибиотикотестировании.

Содержание тимидина и тимина должно быть достаточно снижено, чтобы избежать антагонистического воздействия на триметоприм и сульфаниламиды, поскольку это является необходимым условием для получения удовлетворительных результатов при использовании сред для определения чувствительности к антимикробным препаратам. Необходимое снижение достигается добавлением лизированной крови лошади. Уровень тимидина дополнительно уменьшается под действием тимидинфосфорилазы, высвобождаемой из лизированных эритроцитов лошади.

Микроорганизмы, рост которых зависит от тимидина, не растут при отсутствии тимидина либо растут плохо на средах с пониженным его содержанием.

Методика определения антибиотикочувствительности

1. Приготовьте суспензию исследуемых микроорганизмов.
2. Равномерно распределите суспензию по поверхности среды.
3. Разместите диски с чувствительностью к антибиотикам на засеянной поверхности среды на одинаковом расстоянии друг от друга.
4. Инкубируйте при 37 °C в течение 18 ч.
5. Зафиксируйте полученные зоны задержки роста.

Типы образцов

Клинические образцы:

• изолированные образцы крови;
• моча;
• образцы из дыхательных путей;
• другой клинический материал.

Сбор и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным лабораторным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Присутствующие соли предотвращают резкие сдвиги pH, вызванные образованием кислот; такие сдвиги могут влиять на тест чувствительности, гемолитические реакции и значения минимальной ингибирующей концентрации антимикробных препаратов, чувствительных к pH.
2. Некоторые требовательные микроорганизмы могут не расти.
3. Плотность инокулята влияет на размер зоны задержки роста: чрезмерно плотный инокулят может привести к уменьшению зон, а недостаточный рост — к их увеличению.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с гелем 1,5 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Основная среда: гель светло-янтарного цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий.
• После добавления 7 % м/о стерильной дефибринированной крови: в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 4,3 % м/о при 25 °C.

pH: 7,4 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Технические характеристики

• Назначение изделия: агаровая питательная среда для тестирования диагностической чувствительности
• Форма выпуска: сухой сыпучий порошок
• Масса: 100 г
• Рабочая концентрация при приготовлении: 43,04 г/1000 мл
• Конечный показатель pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,20–7,60
• Температура стерилизации: 121 °C
• Время стерилизации: 15 мин
• Давление при автоклавировании: 15 фунтов (≈0,10 МПа)
• Температура охлаждения основы перед добавлением крови: 45–50 °C
• Добавка для приготовления кровяного агара: 7 % об./об. стерильной дефибринированной крови лошади
• Температура инкубации при определении чувствительности: 37 °C
• Время инкубации при определении чувствительности: 18 ч
• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C

По сравнению с универсальными питательными средами продукт содержит компоненты для снижения активности тимидина и специально обработанный агар, обеспечивающий диффузию антимикробных препаратов из дисков.

Условия хранения и срок годности

Храните сухую среду при температуре 10–30 °C в плотно закрытой ёмкости, а приготовленную среду — при температуре 2–8 °C.

После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков из