HiMedia M495F-500G Агар Кристенсена с цитратом и сульфитом с 1% агара

Питательная дифференциальная среда HiMedia M495F-500G Агар Кристенсена с цитратом и сульфитом с 1% агара производства HiMedia предназначена для дифференциации кишечных бактерий по утилизации цитрата и образованию сероводорода. Среда применяется для биохимического подтверждения изолятов, формирует скошенный агаровый слой с выраженным столбиком и содержит 1,5 % агара по рецептуре производителя.

Назначение

Christensen Citrate Sulphite Agar с 1,5 % агара применяется для дифференциации кишечных бацилл по способности утилизировать цитрат и образовывать сероводород согласно FDA BAM, 1998.

Среда используется при подтверждении выделенных культур Shigella с помощью теста на утилизацию цитрата. Shigella не утилизирует цитрат и даёт отрицательную реакцию на его утилизацию.

Состав

Содержание компонентов приведено в граммах на литр.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Конечный pH при 25 °C: 6,9 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация результатов

Среда Кристенсена с цитратом и сульфитом разработана Edwards и Ewing как модификация железного агара Кристенсена.

Christensen установил, что представители родов Escherichia, Enterobacter, Citrobacter и Salmonella, а также группы Alkalescens-Dispar способны использовать цитрат как источник энергии, тогда как виды Shigella не утилизируют цитрат.

Микроорганизмы, метаболизирующие цитрат как единственный источник углерода, расщепляют цитрат до оксалоацетата и ацетата под действием фермента цитритазы. Другой фермент, оксалоацетатдекарбоксилаза, преобразует оксалоацетат в пируват и CO₂. Далее CO₂ взаимодействует с натрием и водой с образованием карбоната натрия — щелочного соединения. В результате pH среды повышается, а индикатор феноловый красный изменяет цвет с оранжево-красного на вишнёво-красный.

Вишнёвая окраска указывает на положительный результат утилизации цитрата.

Функции компонентов:

• Дрожжевой экстракт обеспечивает питательные вещества, преимущественно азотистые соединения и витамины, необходимые для роста микроорганизмов.
• Гидрохлорид L-цистеина выполняет функцию восстановителя.
• Декстроза является сбраживаемым углеводом.
• Цитрат натрия служит источником энергии для микроорганизмов, утилизирующих цитрат.
• Восстановление цитрата аммония железа до сульфида железа микроорганизмами, продуцирующими H₂S, проявляется почернением среды.
• Тиосульфат натрия усиливает образование H₂S.

При длительной инкубации интенсивно положительные культуры могут вызвать почернение всего столбика среды.

При посеве необходимо избегать слишком высокой посевной дозы: избыточное количество инокулята может привести к ложноположительному результату.

Методика выявления Shigella

Согласно FDA BAM, 1998, восстановление Shigella выполняют двумя способами.

Классический метод

1. Микроорганизм выращивают на селективной среде, например на основе бульона для Shigella с новобиоцином — Shigella Broth Base, M1326.
2. Культуру выделяют на селективной среде, например на агаре МакКонки — MacConkey Agar, M081D.
3. Выделенную культуру дополнительно подтверждают с помощью биохимических тестов.
4. Изолированные на селективном агаре микроорганизмы подтверждают по различным биохимическим реакциям, включая тест на утилизацию цитрата.
5. Для проведения теста на утилизацию цитрата изолированные колонии пересевают на агар Кристенсена с цитратом и сульфитом с 1,5 % агара — Christensen Citrate Sulphite Agar, M495F.
6. Для Shigella ожидается отрицательная реакция утилизации цитрата.

Метод ДНК-гибридизации

Во втором варианте Shigella идентифицируют с использованием технологии ДНК-гибридизации.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 25,29 г сухой среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду в пробирки.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки в наклонном положении, чтобы сформировать скошенный слой с увеличенным объёмом столбика.

Контроль качества

Внешний вид порошка

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до светло-розового цвета.

Желирование

Желирование: плотный гель, сопоставимый с гелем 1,5%-ного агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в пробирках в виде скошенного слоя образуется гель оранжево-красного цвета, очень слабо опалесцирующий.

Реакция среды

Реакция: реакция 2,53%-ного массо-объёмного водного раствора при 25 °C.

• Значение pH: 6,9 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,70–7,10.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: M495F-500G
• Назначение изделия: агар
• Масса: 500 г
• Физ