HiMedia M495F-500G Агар Кристенсена с цитратом и сульфитом с 1% агара

Дифференциальная сухая питательная среда HiMedia M495F-500G Агар Кристенсена с цитратом и сульфитом с 1,5 % агара. Применяется для дифференциации энтеробактерий на основе способности к утилизации цитрата и продукции сероводорода (H₂S) в соответствии с методикой FDA BAM.

Принцип измерения и интерпретация

Среда используется для разделения энтеробактерий по двум признакам:

1. Утилизация цитрата: микроорганизмы, использующие цитрат как единственный источник углерода, расщепляют его до оксалоацетата и ацетата с помощью фермента цитритазы. Оксалоацетатдекарбоксилаза затем превращает оксалоацетат в пируват и CO₂. Углекислый газ взаимодействует с натрием и водой, образуя карбонат натрия — щелочное соединение. В результате pH среды повышается, и индикатор феноловый красный меняет цвет с оранжево-красного на малиновый (cerise). Малиновый цвет свидетельствует о положительной реакции на утилизацию цитрата.
2. Продукция сероводорода (H₂S): организмы, продуцирующие H₂S, восстанавливают цитрат железа (III) аммония до сульфида железа, что проявляется почернением среды. Сульфит натрия усиливает продукцию H₂S. При длительной инкубации сильные положительные культуры могут привести к полному почернению столбика среды.

Роль компонентов:

• Экстракт дрожжей: обеспечивает необходимые питательные вещества, в основном азотистые соединения и витамины.
• L-цистеин гидрохлорид: восстановитель.
• Декстроза: ферментируемый углевод.
• Цитрат натрия: источник энергии для цитрат-положительных организмов.

Методика проведения анализа

1. Приготовление среды: суспендируйте 25,29 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Растворение: нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Розлив: разлейте среду по пробиркам.
4. Стерилизация: автоклавируйте при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
5. Формовка: охладите пробирки в наклонном положении, чтобы сформировались скосы с глубоким столбиком.
6. Инокуляция: при посеве следует избегать слишком массивного инокулята, так как это может привести к ложноположительному результату.

Технические характеристики

Общие параметры

• Вес: 500 г
• Физическая форма: порошок
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)
• Происхождение: без использования компонентов животного происхождения (микробный синтез)

Характеристики готовой среды

• Цвет и прозрачность: оранжево-красный, очень слабо опалесцирующий гель (в пробирках-скосах)
• pH (при 25 °C): 6,9 ± 0,2 (диапазон 6,70–7,10)
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % агаром

Состав, г/л

Культуральные характеристики

Результаты наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Область применения

Среда применяется для подтверждения идентификации микроорганизмов, в частности для дифференциации Shigella (не утилизирует цитрат) от других представителей семейства Enterobacteriaceae. Согласно FDA BAM, идентификация Shigella может проводиться традиционным методом (выделение на селективных средах, таких как бульон для шигелл M1326 с новобиоцином и агар МакКонки M081D, с последующим биохимическим подтверждением на агаре Кристенсена M495F) или методом гибридизации ДНК.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение сухого остатка: при температуре ниже 30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.