Цитратный агар Кристенсена с сульфитом HiMedia M495-500G (уп/500 гр)

Дифференциальная питательная среда Цитратный агар Кристенсена с сульфитом HiMedia M495-500G (уп/500 гр) производства HiMedia предназначена для определения утилизации цитрата и образования H₂S, конечный pH среды составляет 6,7 ± 0,2. Среда применяется для дифференциации представителей родов Escherichia, Enterobacter, Citrobacter, Salmonella и Shigella по утилизации цитрата и продукции H₂S; слишком массивный посев может привести к ложноположительному результату.

Назначение и область применения

Цитратный агар Кристенсена с сульфитом предназначен для выявления способности микроорганизмов использовать цитрат как единственный источник углерода и энергию, а также для обнаружения образования сероводорода (H₂S).

Среда является модификацией железного агара Кристенсена. Модификация описана Эдвардсом и Юингом. По данным Кристенсена, все представители родов Escherichia, Enterobacter, Citrobacter и Salmonella, а также группы Alkalescens-Dispar способны использовать цитрат как источник энергии, тогда как виды рода Shigella не используют цитрат.

Состав

Состав на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Принцип измерения и интерпретация

Микроорганизмы, метаболизирующие цитрат как единственный источник углерода, расщепляют цитрат до оксалоацетата и ацетата с помощью фермента цитритазы. Другой фермент, оксалоацетатдекарбоксилаза, преобразует оксалоацетат в пируват и CO₂. Далее CO₂ соединяется с натрием и водой с образованием карбоната натрия — щелочного соединения.

В результате pH среды повышается, а индикатор феноловый красный изменяет окраску с оранжево-красной на вишнёвую. Вишнёвая окраска указывает на положительный результат утилизации цитрата.

Дрожжевой экстракт обеспечивает микроорганизмы необходимыми питательными веществами, главным образом азотистыми соединениями и витаминами. Гидрохлорид L-цистеина действует как восстановитель. Декстроза является сбраживаемым углеводом. Цитрат натрия служит источником энергии для микроорганизмов, утилизирующих цитрат.

Восстановление цитрата аммония и железа до сульфида железа микроорганизмами, продуцирующими H₂S, проявляется почернением среды. Тиосульфат натрия усиливает образование H₂S. При длительной инкубации сильноположительные культуры окрашивают в чёрный цвет весь столбик среды. Некоторые представители рода Salmonella, включая Salmonella Typhi, дают слабоположительную реакцию; для образования гидросульфита им требуется 2–5 суток.

При посеве необходимо избегать слишком большой посевной дозы, поскольку массивный посев может вызвать ложноположительный результат.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 24,29 г сухой среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения и полностью растворите среду.
3. Разлейте приготовленную среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 12–15 psi (примерно 0,083–0,103 МПа; 0,83–1,03 бар) при температуре 118–121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки в наклонном положении, чтобы сформировать скошенную часть с увеличенным столбиком.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до светло-розового цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,4 % агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: оранжево-красный, очень слабо опалесцирующий гель в пробирках со скошенной поверхностью.
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 2,42 % масс./об. при 25 °C.
• pH: 6,7 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,50–6,90.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

• Масса упаковки: 500 г.
• Назначение изделия: агар.
• Сертификат: ФСЗ 2009/03705.

Условия хранения и срок годности

• Условия хранения сухой среды: при температуре ниже 30 °C в плотно закрытой таре.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Сравнительный контекст

В отличие от стандартного цитратного агара Кристенсена, модификация M495 дополнительно содержит цитрат аммония и железа и тиосульфат натрия для визуального выявления образования H₂S по почернению среды.

Производитель и модель

• Производитель: HiMedia.
• Модель: M495-500G.
• Полное наименование: Цитратный агар Кристенсена с сульфитом HiMedia M495-500G (уп/500 гр).