HiMedia M493I-500G Агар с желчью, эскулином и азидом

Селективная питательная среда HiMedia M493I-500G Агар с желчью, эскулином и азидом для изоляции и предварительной идентификации фекальных стрептококков. Состав и критерии эффективности среды соответствуют спецификациям стандарта ISO 7899-1:1984.

Принцип измерения и интерпретация

Среда основана на способности энтерококков и стрептококков группы D гидролизовать эскулин до эскулетина и декстрозы. Эскулетин вступает в реакцию с цитратом железа, образуя коричневато-черный осадок.

• Компоненты и их роль:

  • Ферментативный гидролизат казеина, пептический digests тканей животных и экстракт дрожжей: источники углерода, азота, аминокислот, витаминов и основных питательных веществ.
  • Желчь (oxgall) и азид натрия: ингибируют рост большинства сопутствующих бактерий.
  • Эскулин: субстрат для гидролиза.
  • Цитрат железа (III) аммония: индикатор, образующий с эскулетином темный комплекс.

• Интерпретация результатов:

  • Положительная реакция: появление зоны черного осадка вокруг колоний. При использовании среды в виде скоса (в пробирках) положительным считается почернение более половины скоса в течение 24–48 часов.
  • Отрицательная реакция: полное отсутствие почернения или почернение менее половины скоса за 24–48 часов.
  • Особенности: слабый положительный результат могут давать стрептококки группы Viridans, а также виды Leuconostoc, Pediococcus и Lactococcus.

Методика проведения анализа

Использование с мембранными фильтрами

1. Образцы воды фильтруют через мембранные фильтры.
2. Мембраны асептически переносят на среду Slanetz and Bartely (M612I).
3. После инкубации красные или бордовые колонии подтверждают, асептически перенося мембранный фильтр на чашку с агаром с желчью, эскулином и азидом, предварительно нагретую до 44 °C.
4. Инкубируют при температуре 44 ± 0,5 °C в течение 2 часов.
5. Все типичные колонии, вызывающие коричнево-черное окрашивание окружающей среды, подсчитывают как кишечные энтерококки.

Прямой посев

Для прямой изоляции энтерококков (без использования мембранных фильтров) инкубацию проводят при температуре 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Приготовление и стерилизация

1. Суспендировать 56,65 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагревать до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.

Меры предосторожности: азид натрия может образовывать взрывоопасные азиды металлов при контакте с материалами водопроводных труб. Рекомендуется использовать достаточное количество воды для промывки стоков.

Технические характеристики

Состав, г/л:

• Конечный pH (при 25 °C): 7,2 ± 0,2
• Происхождение компонентов: животное
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)
• Вес: 500 г

Контроль качества

• Внешний вид: светло-желтый или коричневато-желтый гомогенный свободнотекущий порошок.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: янтарный раствор, от прозрачного до слегка опалесцирующего с голубоватым оттенком (в чашках Петри).
• Реакция: pH 5,67 % (м/об) водного раствора при 25 °C составляет 7,2 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре ниже 30 °C.
• Хранение готовой среды: при температуре 28 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.