HiMedia M493I-500G Агар с желчью, эскулином и азидом

Селективная питательная среда HiMedia M493I-500G Агар с желчью, эскулином и азидом предназначена для выделения и предположительной идентификации фекальных стрептококков. Агар применяется для микробиологического анализа воды и прямого выделения энтерококков; масса упаковки — 500 г, температура хранения сухой среды — ниже 30 °C.

Назначение и область применения

Bile Esculin Azide Agar — селективная питательная среда для выделения и предположительной идентификации фекальных стрептококков, включая энтерококки.

Среда применяется для:

• анализа подозрительных проб воды методом мембранной фильтрации;
• подтверждения типичных колоний, выращенных на среде Сланеца и Бартли;
• прямого выделения энтерококков без применения мембранного фильтра;
• дифференциации стрептококков группы D от стрептококков, не относящихся к группе D;
• дифференциации представителей родов Enterobacteriaceae, Klebsiella, Enterobacter, Serratia от других родов семейства Enterobacteriaceae по способности гидролизовать эскулин.

Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям ISO 7899-1:1984.

Состав

Состав среды на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности среды.

Принцип действия и интерпретация

Стрептококки группы D содержат в клеточной стенке антиген липотейхоевой кислоты группы D. Виды, ранее относимые к группе D и являющиеся преимущественными нормальными обитателями желудочно-кишечного тракта человека, обозначают как фекальные стрептококки или энтерококки.

Энтерококки и стрептококки группы D гидролизуют эскулин с образованием эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с цитратом железа с образованием коричневато-чёрного осадка. На чашке Петри положительная реакция визуализируется как зона чёрного осадка вокруг колоний.

При разливе среды в пробирки в виде скошенного агара:

• положительная реакция — почернение более половины скошенной части в течение 24–48 ч;
• отрицательная реакция — полное отсутствие почернения либо почернение менее половины скошенной части в течение 24–48 ч.

Некоторые ограничения интерпретации:

• стрептококки группы viridans иногда дают слабоположительную реакцию;
• виды Leuconostoc, Pediococcus и Lactococcus, вызывающие инфекции у человека, могут давать положительную реакцию на желчный эскулин;
• для идентификации энтерококков необходимо дополнительно выполнять другие тесты, включая определение устойчивости к соли.

Для усиления роста энтерококков желчно-эскулиновый агар можно дополнить лошадиной сывороткой в концентрации 50 мл/л.

Bile Esculin Azide Agar является модификацией желчно-эскулинового агара. В модифицированной среде снижена концентрация желчи и дополнительно введён азид натрия. Среда, рекомендованная комитетом ISO, представляет собой модификацию среды Bile Esculin Azide Agar M493 с изменённым типом используемых источников углерода.

Ферментативный гидролизат казеина, пептический перевар животной ткани и дрожжевой экстракт служат источниками углерода, азота, аминокислот, витаминов и других необходимых питательных веществ. Бычья желчь и азид натрия подавляют рост большинства сопутствующих бактерий.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 56,65 г сухой среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов, что соответствует примерно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.

Меры предосторожности

Азид натрия способен образовывать взрывоопасные азиды металлов при контакте с материалами сантехнических коммуникаций. Для удаления одноразовых материалов необходимо использовать достаточное количество воды для промывки.

Методика анализа проб воды

Мембранная фильтрация и подтверждение энтерококков

1. Профильтруйте подозрительную пробу воды через мембранный фильтр.
2. Асептически поместите мембранный фильтр на среду Сланеца и Бартли M612I.
3. После инкубации отберите красные или бордовые колонии.
4. Для подтверждения асептически перенесите мембранный фильтр на чашку с Bile Esculin Azide Agar, предварительно нагретую до 44 °C.
5. После посева инкубируйте при 44 ± 0,5 °C в течение 2 ч.
6. Подсчитайте все типичные колонии, вокруг которых в среде наблюдается коричнево-чёрное окрашивание; такие колонии учитывают как кишечные энтерококки.

Прямое выделение энтерококков

Bile Esculin Azide Agar также можно использовать для прямого выделения энтерококков без мембранного фильтра. Инкубируйте посевы при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид сухой среды: однородный сыпучий порошок светло-жёлтого или коричневато-жёлтого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: раствор янтарного цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий, с голубоватым оттенком, образующийся в чашках Петри.

Реакция и pH

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 5,67 % масс./об. при 25 °C.

pH: 7,00–7,40.

Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: M493I-500G
• Назначение изделия: агар
• Масса: 500 г
• Температура хранения сухой среды: ниже 30 °C
• Условия хранения приготовленной среды: 28 °C
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке

Сравнительное техническое отличие

В отличие от желчно-эскулинового агара, Bile Esculin Azide Agar содержит сниженное количество желчи и дополнительный азид натрия, подавляющие рост большинства сопутствующих бактерий; среда M493I также отличается типом источников углерода.