Желчно-эскулиновый агар с азидом натрия HiMedia M493-500G (уп/500 гр)

Питательная агаровая среда HiMedia M493-500G «Желчно-эскулиновый агар с азидом натрия» производства HiMedia предназначена для селективного выделения и предварительной идентификации фекальных стрептококков (энтерококков). Среда применяется для клинических и пищевых образцов, а положительная реакция определяется по почернению среды вследствие гидролиза эскулина.

Назначение

Желчно-эскулиновый агар с азидом натрия HiMedia M493-500G — диагностическая агаровая питательная среда в виде порошка для селективного выделения и предварительной идентификации фекальных стрептококков (энтерококков).

• Тип питательной среды: диагностическая
• Назначение изделия: агар
• Область применения: клинические образцы кала, пищевые образцы
• Сертификат: ФСЗ 2009/03709
• Происхождение: животное
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: HDPE

Состав

Состав среды приведён для 1 л:

Примечания к составу:

• Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту.
• Желчь эквивалентна бычьей желчи.
• Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами рабочих характеристик среды.

Принцип действия и интерпретация результатов

Стрептококки группы D имеют в составе клеточной стенки антиген группы D — липотейхоевую кислоту. Представители бывшей группы D, являющиеся преобладающей частью нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта человека, обозначаются как фекальные стрептококки или энтерококки.

Энтерококки и стрептококки группы D гидролизуют эскулин с образованием эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с цитратом железа с образованием коричнево-чёрного осадка, визуализируемого как зона чёрного осадка вокруг колоний.

Желчно-эскулиновый агар первоначально был разработан Swan для выделения и идентификации стрептококков группы D из пищевых продуктов. Позднее Facklam и Moody показали, что желчно-эскулиновый агар позволяет дифференцировать стрептококки группы D от стрептококков, не относящихся к группе D. Гидролиз эскулина на этой среде также может способствовать дифференциации представителей родов Enterobacteriaceae, Klebsiella, Enterobacter и Serratia от других родов семейства Enterobacteriaceae. Для идентификации энтерококков необходимо дополнительно проводить другие тесты, включая определение устойчивости к соли.

Желчно-эскулиновый агар с азидом натрия представляет собой модификацию желчно-эскулинового агара по Isenberg: концентрация желчи в среде снижена, дополнительно введён азид натрия.

Триптон, протеозопептон и пептон HM B служат источниками углерода, азота, аминокислот, витаминов и других необходимых питательных веществ. Желчь и азид натрия подавляют рост большинства сопутствующих бактерий. Эскулин гидролизуется до эскулетина и декстрозы; эскулетин реагирует с цитратом железа с образованием тёмно-коричневого или чёрного комплекса, который проявляется в виде зоны чёрного осадка вокруг колоний.

Если среда разлита в пробирки в виде скошенного агара, положительная реакция выражается в почернении более половины скошенной части в течение 24–48 ч. Полное отсутствие почернения или почернение менее половины скошенной части в течение 24–48 ч расценивается как отрицательная реакция.

Стрептококки группы viridans иногда дают слабоположительную реакцию. Виды Leuconostoc, Pediococcus и Lactococcus, вызывающие инфекции у человека, также дают положительный тест на желчь и эскулин.

Для усиления роста энтерококков желчно-эскулиновый агар можно дополнить лошадиной сывороткой в концентрации 50 мл/л.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 56,65 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 psi (примерно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика анализа водных образцов

1. Подозрительные образцы воды отфильтруйте через мембранные фильтры.
2. Мембранные фильтры асептически перенесите на среду Slanetz и Bartley (M612I).
3. После инкубации отберите красные или бордовые колонии.
4. Для подтверждения асептически перенесите мембранный фильтр на чашку с желчно-эскулиновым агаром с азидом натрия, предварительно прогретую до 44 °C.
5. После инокуляции инкубируйте при температуре 44 ± 0,5 °C в течение 2 ч.
6. Все типичные колонии, вокруг которых наблюдается коричнево-чёрное окрашивание среды, подсчитайте как кишечные энтерококки.

Для прямого выделения энтерококков без мембранного фильтра среду инкубируют при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Пробоподготовка и обращение с образцами

• Тип клинического образца: кал.
• Тип пищевого образца: пищевые продукты.
• Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.
• Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.
• После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Порошок от кремового до жёлтого цвета, однородный, сыпучий.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель янтарного цвета с голубоватым оттенком.

Реакция среды

• Концентрация водного раствора: 5,67 % м/об.
• Температура определения: 25 °C.
• Реакция: pH 7,1 ± 0,2.

Диапазон pH

pH 6,90–7,30.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Условия хранения и срок годности

• Условия хранения сухого продукта: 10–30 °C, в плотно закрытом контейнере.
• Условия хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия хранить продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков вследствие гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывать контейнер.
• Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение установленного срока годности и при соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Ограничения применения

1. Разные микроорганизмы имеют различные требования к росту и могут демонстрировать неодинаковые модели роста на этой среде.
2. Каждая серия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). Для любого специфического микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, пользователю рекомендуется валидировать среду с учётом конкретных требований применения.
3. Для идентификации энтерококков одного теста на желчь и эскулин недостаточно; необходимо выполнять дополнительные тесты, включая определение устойчивости к соли.
4. Стрептококки группы viridans могут давать слабоположительную реакцию.
5. Виды Leuconostoc, Pediococcus и Lactococcus, вызывающие инфекции у человека, могут давать положительный тест на желчь и эскулин.

Меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед вскрытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соб