HiMedia M493-100G Агар с желчью, эскулином и азидом

Селективная питательная среда HiMedia M493-100G Агар с желчью, эскулином и азидом для изоляции и предварительной идентификации фекальных стрептококков. Применяется для анализа клинических образцов (фекалии) и проб пищевых продуктов; содержит азид натрия для подавления роста большинства сопутствующих бактерий.

Принцип измерения и интерпретация

Среда основана на способности энтерококков и стрептококков группы D гидролизовать эскулин до эскулетина и декстрозы. Эскулетин взаимодействует с цитратом железа (III), образуя коричнево-черный осадок, который визуализируется как зона темного окрашивания вокруг колоний.

В данной модификации (по Изенбергу) концентрация желчи снижена, и добавлен азид натрия для повышения селективности. Триптон, протеоз-пептон и HM-пептон B служат источниками углерода, азота, аминокислот и витаминов.

Интерпретация результатов:

• Положительная реакция: образование темно-коричневого или черного комплекса вокруг колоний. При использовании среды в виде скоса (в пробирках) положительным считается почернение более половины скоса в течение 24–48 часов.
• Отрицательная реакция: полное отсутствие почернения или окрашивание менее половины скоса за 24–48 часов.

Примечание: Слабоположительная реакция иногда наблюдается у стрептококков группы Viridans, а также у видов Leuconostoc, Pediococcus и Lactococcus, вызывающих инфекции у человека.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендировать 56,65 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения с перемешиванием до полного растворения.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C, тщательно перемешать и разлить по стерильным чашкам Петри.

Процедура анализа

Для прямого выделения энтерококков:

• Инокулировать среду и инкубировать при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Для анализа проб воды (метод мембранной фильтрации):

1. Пробы воды фильтруют через мембранные фильтры.
2. Мембраны асептически помещают на среду Slanetz and Bartely (M612I).
3. Колонии красного или бордового цвета после инкубации переносят асептически на чашки с агаром с желчью, эскулином и азидом, предварительно нагретые до 44 °C.
4. Инкубировать при 44 $\pm$ 0,5 °C в течение 2 часов.
5. Все типичные колонии с коричнево-черным окрашиванием окружающей среды подсчитывают как кишечные энтерококки.

Технические характеристики

Состав, г/л:

• Конечный pH (при 25 °C): 7,1 $\pm$ 0,2
• Внешний вид: однородный свободнотекучий порошок от кремового до желтого цвета
• Желирование: плотный гель (сопоставимо с 1,5 % агаром)
• Цвет и прозрачность готовой среды: янтарный, прозрачный или слегка опалесцирующий гель с голубоватым оттенком (в чашках Петри)
• Диапазон pH: 6,90–7,30
• Происхождение компонентов: животное
• Форма выпуска: порошок
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Область применения

• Клинические образцы: анализ фекалий.
• Пищевая промышленность: исследование образцов продуктов питания.
• Экологический мониторинг: анализ проб воды.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать для предотвращения комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания.

Меры предосторожности и ограничения

• Осторожно: азид натрия может образовывать взрывоопасные азиды металлов при контакте с материалами водопроводных труб. Рекомендуется промывать сливы большим количеством воды.
• Среда предназначена только для профессионального использования в лабораторных условиях (In Vitro диагностика).
• Требуется использование средств индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица).
• Индивидуальные организмы могут проявлять вариативность роста; рекомендуется валидация среды для конкретных микроорганизмов, не указанных в сертификате анализа (COA).

Утилизация

Загрязненные материалы и использованные среды должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации в соответствии с установленными лабораторными правилами обращения с инфекционными материалами.