HiMedia M467F-500G Агар Хектоена энтерик с 1.2% агара

Порошкообразная питательная среда HiMedia M467F-500G Агар Хектоена энтерик с 1.2% агара предназначена для дифференциального выделения Salmonella и Shigella из пищевых продуктов. Приготовление среды выполняют без автоклавирования и перегрева, с последующим охлаждением до 45–50 °C и разливом в стерильные чашки Петри.

Назначение

Среда рекомендована для выделения видов Shigella и Salmonella из образцов пищевых продуктов, включая продукты из мяса птицы, яйца и молочные продукты. Среда Хектоена энтерик с агаром используется как этап многоступенчатой процедуры выделения возбудителей сальмонеллёза и шигеллёза.

Состав и рабочие характеристики среды соответствуют методикам FDA BAM, ISO 21567:2004, APHA и ISO 6579-1:2017(E). В методике ISO 6579-1:2017 среда применяется совместно с другими селективными и дифференциальными средами.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Принцип действия и интерпретация

Повышенная концентрация углеводов и пептона снижает ингибирующее воздействие желчных солей и индикаторов, благодаря чему обеспечивается хороший рост видов Salmonella и Shigella при подавлении нормальной кишечной микрофлоры.

В состав входят три углевода — лактоза, сахароза и салицин — для дифференциации кишечных патогенов. Повышенная концентрация лактозы облегчает визуализацию кишечных патогенов и снижает вероятность ошибок, связанных с замедленной ферментацией лактозы. Салицин ферментируется многими колиформными бактериями, включая микроорганизмы, не ферментирующие лактозу и сахарозу.

Сочетание цитрата аммонийного железа и тиосульфата натрия обеспечивает обнаружение образования сероводорода (H₂S), о котором свидетельствует появление чёрных колоний. Индикаторная система из кислотного фуксина и бромтимолового синего обладает меньшей токсичностью по сравнению с другими кишечными средами. Низкая концентрация желчных солей допускает рост Shigella и Salmonella. Повышенная концентрация пептона снижает ингибирующее действие желчных солей.

На среде появление сине-зелёных или синих колоний с чёрными центрами или без них указывает на возможное присутствие Salmonella. Некоторые культуры Salmonella образуют колонии с крупными блестящими чёрными центрами либо почти полностью чёрные колонии.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 75,67 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Не автоклавируйте и не перегревайте среду.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Тип образца

Пищевые продукты.

Отбор и обработка образцов

Метод FDA BAM

1. Подозрительный образец выращивают в тетратионатном бульоне M032F в течение ночи.
2. Перемешивают культуру; для пробирки используют вихревое перемешивание.
3. Петлёй диаметром 3 мм переносят 10 мкл инкубированного тетратионатного бульона и выполняют посев штрихом на агар Хектоена энтерик с 1,4 % агара.
4. Сине-зелёные или синие колонии с чёрными центрами или без них рассматривают как признак возможного присутствия Salmonella.
5. Для подтверждения проводят дополнительные исследования, поскольку многие культуры Salmonella могут образовывать колонии с крупными блестящими чёрными центрами или почти полностью чёрные колонии.

Обработка по ISO 21567:2004 и APHA

Обогащение

К пробе массой x г или объёмом x мл добавляют 9x мл шигеллёзного бульона, содержащего 0,5 мкг новобиоцина, для получения разведения исследуемого образца 1:10.

Шигеллёзный бульон инкубируют в анаэробных условиях при 41,5 ± 1 °C в течение 16–20 ч.

Посев на чашки

Культуры, полученные после обогащения, инокулируют на поверхность агара Хектоена энтерик (HE). Инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 20–24 ч. Исследуют типичные колонии Shigella и выполняют биохимические тесты для подтверждения.

Обработка по ISO 6579-1:2017

Предварительное обогащение

Образцы массой 25 г помещают в 225 мл буферной пептонной воды M14941. Инкубируют при 34–38 °C в течение 18 ± 2 ч.

Селективное обогащение

1. 0,1 мл предварительно обогащённого образца инокулируют в 10 мл бульона RVS M1448I или на агар MSRV M1428.
2. Инкубируют при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
3. 1 мл культуры инокулируют в бульон MKTTn M14961.
4. Инкубируют при 36 ± 2 °C в течение 24 ± 3 ч.

Выделение

Полученную культуру высеивают на модифицированный агар XLD M0311 и инкубируют при 36 ± 2 °C в течение 24 ± 3 ч.

Одновременно выполняют посев на вторую изоляционную среду, например на агар Хектоена энтерик, висмут-сульфитный агар или бриллиантовый зелёный агар.

Подтверждение

Для подтверждения выполняют биохимические и серологические тесты.

Контроль качества

Внешний вид

Порошок от кремового до жёлтого цвета с желтовато-коричневым оттенком, однородный, свободно сыпучий.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с гелем, содержащим 1,4 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется зелёный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.

Реакция среды

Реакция водного раствора с концентрацией 7,57 % масс./об. при 25 °C: pH 7,5 ± 0,2.

pH

Диапазон pH: 7,30–7,70.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35 °C в течение 22–26 ч.