Основа среды Кортофа для лептоспир модифицированная HiMedia M457-500G (уп/500 гр)

Основа среды Кортофа для лептоспир модифицированная HiMedia M457-500G (уп/500 гр) производства HiMedia. Рекомендуется для изоляции, культивирования и поддержания жизнеспособности видов Leptospira.

Принцип измерения

Среда разработана по методике Кортофа для выращивания лептоспир. Пептон обеспечивает поступление аминокислот и других азотистых веществ, необходимых для роста бактерий. Раствор гемоглобина и инактивированная сыворотка крови служат дополнительными источниками питательных веществ. Соли обеспечивают организм необходимыми микроэлементами, фосфаты формируют буферную систему, а хлорид натрия поддерживает осмотический баланс.

Область применения

Применяется для диагностики лептоспироза — острого лихорадочного заболевания. Прямой посев крови является наиболее надежным методом обнаружения Leptospira в первую неделю болезни. В дальнейшем (в течение нескольких месяцев) лептоспиры могут быть выделены из неразбавленных образцов мочи. При вскрытии трупа возбудитель может быть изолирован из тканей почек, печени, а также из крови и мочи.

Тип образцов

Клинические образцы — моча.

Методика проведения анализа

1. Приготовление основы

1. Суспендируйте 3,42 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте для полного растворения среды.
3. Разлейте по 100 мл в колбы.
4. Стерилизуйте в автоклаве при 115 °C (давление $\approx$0,07 МПа) в течение 15 минут.
5. Охладите до 45–50 °C.

2. Приготовление раствора гемоглобина

1. К сгустку крове кролика после удаления сыворотки добавьте равный объем очищенной или дистиллированной воды.
2. Повторяйте циклы замораживания и оттаивания для гемолиза эритроцитов.
3. Стерилизуйте методом фильтрации через фильтры Сейтца или Millipore.

3. Приготовление полной среды

1. К 100 мл стерильной основы добавьте 8 мл стерильной инактивированной сыворотки крови и 0,8 мл стерильного раствора гемоглобина.
2. Тщательно перемешайте.
3. При необходимости разлейте по 2–3 мл в стерильные пробирки или флаконы Bijou с завинчивающимися крышками.
4. Проверьте стерильность путем инкубации при 37 °C.

4. Инкубация и интерпретация результатов

• Культуры инкубируют при комнатной температуре в темноте до 6 недель.
• Организмы растут ниже поверхности среды.
• Еженедельно исследуйте материал, взятый на несколько сантиметров ниже поверхности бульона, с помощью прямой «мокрой» подготовки под темнопольным микроскопом. Лептоспиры проявляют характерную штопорообразную подвижность.
• Проверяйте пробирки на наличие роста каждые 5–7 дней. Рост проявляется в виде кольцевой зоны (диска) на глубине 1–3 см от поверхности среды.
• Отсутствие кольцевой зоны не всегда означает отсутствие лептоспир.
• Для микроскопии возьмите небольшое количество материала из зоны диска (окраска по Грамму неэффективна). Микроколонии можно фиксировать метанолом и окрашивать по Гимзе для визуализации палочковидных форм.

Технические характеристики

Состав, г/л:

• Конечный pH (при 25 °C): 7,2 $\pm$ 0,2
• pH диапазон: 7,00–7,40

Дополнительные параметры:

Контроль качества

Внешний вид и реакция

• Внешний вид: однородный свободнотекущий порошок от почти белого до желтого цвета.
• Цвет и прозрачность готовой среды: желтовато-коричневый раствор, от прозрачного до слегка опалесцирующего (после добавления сыворотки и гемоглобина).
• Реакция: pH 7,2 $\pm$ 0,2 для 0,342% (м/об) водного раствора при 25 °C.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при добавлении инактивированной сыворотки крови и стерильного раствора гемоглобина после инкубации при 30 °C в течение 2–7 дней.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C.
• Хранение готовой среды: при температуре 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания.

Ограничения и меры предосторожности

• Ограничения: лептоспиры могут выделяться спорадически, поэтому посев последовательных образцов с интервалом минимум в 1 день повышает вероятность получения положительного результата.
• Меры безопасности: только для диагностики in vitro и профессионального использования. Использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица.
• Утилизация: загрязненные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве перед утилизацией.

Комплект поставки

• Основа среды Кортофа модифицированная (порошок), 500 г.
• Сертификат: ФСЗ 2009/03706.