Основа среды Кортофа для лептоспир модифицированная HiMedia M457-500G (уп/500 гр)

Питательная среда Основа среды Кортофа для лептоспир модифицированная HiMedia M457-500G (уп/500 гр) с конечным pH 7,2 ± 0,2 предназначена для выделения, культивирования и поддержания видов Leptospira. Применяется для исследования клинических образцов, преимущественно мочи, при этом культивирование требует инкубации в темноте при комнатной температуре до 6 недель.

Назначение

Основа среды рекомендована для выделения, культивирования и поддержания видов Leptospira. Среда предназначена для профессионального применения in vitro и используется при микробиологическом исследовании клинических образцов.

Состав

Для приготовления среды используется следующий состав:

Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Приготовление среды

Приготовление основы

1. Суспендируйте 3,42 г сухой основы в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте среду до полного растворения.
3. Распределите среду по 100 мл во флаконы.
4. Стерилизуйте автоклавированием при 115 °C в течение 15 мин. Условие соответствует давлению приблизительно 0,069 МПа (10 фунтов давления).
5. Охладите основу до 45–50 °C.

Приготовление раствора гемоглобина

1. После удаления сыворотки добавьте к сгустку кроличьей крови равный объём очищенной или дистиллированной воды.
2. Многократно заморозьте и разморозьте смесь для гемолиза форменных элементов крови.
3. Стерилизуйте раствор фильтрацией через фильтр Зейтца или мембранный фильтр Millipore.

Приготовление полной среды

1. К 100 мл стерильной основы добавьте 8 мл стерильной инактивированной сыворотки крови и 0,8 мл стерильного раствора гемоглобина.
2. Тщательно перемешайте.
3. При необходимости распределите среду по 2–3 мл в стерильные флаконы или пробирки Bijou с завинчивающимися крышками.
4. Проверьте стерильность инкубацией при 37 °C.

Принцип действия и интерпретация результатов

Лептоспироз — острое лихорадочное заболевание, вызываемое представителями рода Leptospira. Прямое культивирование крови является наиболее надёжным способом обнаружения Leptospira в течение первой недели заболевания. После первой недели заболевания и в течение нескольких последующих месяцев лептоспиры могут выделяться при прямом культивировании неразбавленных образцов мочи.

При вскрытии лептоспиры могут быть выделены из тканей почек и печени, а также из крови и мочи. Основа среды для лептоспир Кортофа модифицированная сформулирована по описанию Кортофа для культивирования и поддержания видов Leptospira.

Компоненты среды выполняют следующие функции:

• Пептон поставляет аминокислоты и другие азотсодержащие вещества, необходимые для роста бактерий.
• Раствор гемоглобина и инактивированная сыворотка крови являются дополнительными источниками питательных веществ для лептоспир.
• Соли обеспечивают микроорганизмы необходимыми питательными веществами.
• Фосфаты образуют буферную систему.
• Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие и обеспечивает поступление необходимых ионов.

Все культуры инкубируют в темноте при комнатной температуре до 6 недель. Микроорганизмы растут ниже поверхности среды. Материал, отобранный на глубине нескольких сантиметров ниже поверхности бульонной культуры, следует еженедельно исследовать на наличие роста методом прямого влажного препарата в тёмном поле.

Лептоспиры демонстрируют подвижность, напоминающую движение штопора. Пробирки следует проверять на наличие роста каждые 5–7 дней. Рост проявляется в виде кольцевой зоны (диска), расположенной на 1–3 см ниже поверхности среды.

Отсутствие кольцевой зоны роста не означает, что лептоспиры обязательно отсутствуют. Небольшое количество материала из зоны диска следует извлечь и исследовать микроскопически. Окраска по Граму для этого исследования неудовлетворительна. Микроколонии можно фиксировать метанолом и окрашивать по Гимзе для выявления палочковидных форм.

Образцы

Тип образца: клинические образцы — моча.

Сбор и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами соблюдайте соответствующие методики обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами. После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностического применения in vitro.
• Только для профессионального использования.
• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Правила безопасности могут быть приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

Последовательное исследование образцов, взятых с интервалом не менее 1 дня, повышает вероятность получения положительной культуры, поскольку выделение Leptospira может происходить периодически.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, легко сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

После добавления сыворотки и стерильного раствора гемоглобина образуется прозрачный или слегка опалесцирующий раствор жёлто-коричневого цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 0,342 % масса/объём при 25 °C.

pH: 7,2 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления инактивированной сыворотки крови и стерильного раствора гемоглобина, после инкубации при 30 °C в течение 2–7 суток.

Технические характеристики

• Назначение изделия: основа.
• Сертификат: ФСЗ 2009/03706.
• Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.
• pH водного раствора: 7,00–7,40.
• Концентрация раствора при контроле реакции: 0,342 % масса/объём.
• Температура автоклавирования: 115 °C.
• Время автоклавирования: 15 мин.
• Температура охлаждения основы перед приготовлением полной среды: 45–50 °C.
• Температура инкубации для проверки стерильности: 37 °C.
• Температура инкубации для культуральных характеристик: 30 °C.