HiMedia M457-100G Основа среды для лептоспир, Кортоф

Основа питательной среды для лептоспир Кортоф (модифицированная) HiMedia M457-100G. Рекомендуется для изоляции, культивирования и поддержания видов Leptospira; вес упаковки 100 г.

Принцип измерения

Среда разработана по методике Кортофа для выращивания лептоспир. Пептон обеспечивает поступление аминокислот и азотистых веществ, необходимых для роста бактерий. Раствор гемоглобина и инактивированная сыворотка крови служат дополнительными источниками питательных веществ. Соли обеспечивают организм необходимыми микроэлементами, фосфаты создают буферную систему, а хлорид натрия поддерживает осмотический баланс.

Лептоспиры растут ниже поверхности среды. Контроль роста осуществляется еженедельно путем исследования материала, взятого с глубины нескольких сантиметров от поверхности бульонной культуры, с помощью прямой «мокрой» подготовки под темнопольным микроскопом, где микроорганизмы проявляют характерную штопообразную подвижность. Рост обычно проявляется в виде кольцевой зоны (диска) на глубине 1–3 см от поверхности.

Методика приготовления

1. Приготовление основы

1. Суспендируйте 3,42 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте до полного растворения компонентов.
3. Разлейте по 100 мл в колбы.
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 115 °C (давление $\approx$0,07 МПа) в течение 15 минут.
5. Охладите до 45–50 °C.

2. Приготовление раствора гемоглобина

1. К сгустку кролика (после удаления сыворотки) добавьте равный объем очищенной или дистиллированной воды.
2. Повторяйте циклы замораживания и оттаивания до полного гемолиза эритроцитов.
3. Стерилизуйте методом фильтрации через фильтры Зайтца или Millipore.

3. Приготовление полной среды

1. К 100 мл стерильной основы добавьте 8 мл стерильной инактивированной сыворотки крови и 0,8 мл стерильного раствора гемоглобина.
2. Тщательно перемешайте.
3. При необходимости разлейте по 2–3 мл в стерильные пробирки или бутыли Bijou с винтовыми крышками.
4. Проверьте стерильность путем инкубации при 37 °C.

Область применения

Применяется для исследования клинических образцов (моча). Прямое культивирование крови является наиболее надежным методом обнаружения лептоспир в первую неделю заболевания. В последующие месяцы изоляция возможна из неразбавленных образцов мочи, а при аутопсии — из тканей почек, печени, крови и мочи.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,2 ± 0,2
• Внешний вид: однородный свободнотекущий порошок от белого до желтоватого цвета
• Цвет и прозрачность готовой среды: желтовато-коричневый, прозрачный или слегка опалесцирующий раствор (после добавления сыворотки и гемоглобина)
• Диапазон pH: 7,00–7,40

Дополнительные параметры

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при использовании инактивированной сыворотки крови и стерильного раствора гемоглобина после инкубации при 30 °C в течение 2–7 дней.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия плотно закрывайте флакон для предотвращения образования комков. Хранить в сухом проветриваемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.
• Инкубация культур: при комнатной температуре в темном месте до 6 недель.

Ограничения и предостережения

• Только для диагностики in vitro и профессионального использования.
• Лептоспиры могут выделяться спорадически, поэтому посев последовательных образцов с интервалом минимум в 1 день повышает вероятность получения положительного результата.
• Окрашивание по Граму для данной группы микроорганизмов не является удовлетворительным; для визуализации палочковидных форм рекомендуется фиксация метанолом и окрашивание по Гимзе.
• Контаминированные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве перед утилизацией.