HiMedia M457-100G Основа среды для лептоспир, Кортоф

Основа питательной среды HiMedia M457-100G Основа среды для лептоспир, Кортоф — порошкообразная основа для приготовления среды с добавлением инактивированной сыворотки крови и раствора гемоглобина. Предназначена для выделения, культивирования и поддержания видов Leptospira; хранение основы — при 10–30 °C в плотно закрытой ёмкости.

Назначение

Среда рекомендована для выделения, культивирования и поддержания видов Leptospira. Тип исследуемого материала — клинические образцы мочи.

Состав

Состав на 1 л:

Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Приготовление среды

Приготовление основы

1. Суспендируйте 3,42 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию для полного растворения среды.
3. Разлейте среду порциями по 100 мл в колбы.
4. Стерилизуйте в автоклаве при 115 °C в течение 15 мин.
5. Охладите стерильную основу до 45–50 °C.

Примечание: режим 115 °C соответствует давлению 10 фунтов на квадратный дюйм, приблизительно 0,069 МПа.

Приготовление раствора гемоглобина

1. После удаления сыворотки добавьте к сгустку кроличьей крови равный объём очищенной или дистиллированной воды.
2. Для гемолиза форменных элементов крови многократно заморозьте и разморозьте смесь.
3. Стерилизуйте раствор фильтрацией через фильтр Seitz или Millipore.

Приготовление полной среды

1. К 100 мл стерильной основы добавьте 8 мл стерильной инактивированной сыворотки крови.
2. Добавьте 0,8 мл стерильного раствора гемоглобина.
3. Тщательно перемешайте.
4. При необходимости разлейте среду по 2–3 мл в стерильные флаконы или пробирки Bijou с завинчивающимися крышками.
5. Проверьте стерильность приготовленной среды инкубацией при 37 °C.

Принцип и интерпретация

Лептоспироз — острое лихорадочное заболевание, вызываемое представителями рода Leptospira. Прямое культивирование крови является наиболее надёжным способом обнаружения Leptospira в течение первой недели заболевания. После первой недели заболевания и в течение нескольких последующих месяцев лептоспиры могут выделяться прямым культивированием неразбавленных образцов мочи. При патологоанатомическом исследовании лептоспиры могут быть выделены из тканей почек и печени, а также из крови и мочи.

Основа среды для лептоспир, Кортоф, модифицированная, разработана по составу Кортофа для культивирования и поддержания видов Leptospira.

Пептон обеспечивает аминокислотами и другими азотсодержащими веществами, необходимыми для роста бактерий. Раствор гемоглобина и инактивированная сыворотка крови служат дополнительными источниками питательных веществ для лептоспир. Соли поставляют необходимые для роста микроорганизмов питательные вещества. Фосфаты образуют буферную систему, а хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие и обеспечивает организм необходимыми ионами.

Все культуры инкубируют в темноте при комнатной температуре в течение периода до 6 недель. Микроорганизмы растут ниже поверхности среды. Материал, отобранный на глубине нескольких сантиметров ниже поверхности бульонной культуры, следует еженедельно исследовать на наличие роста методом прямого влажного препарата в тёмном поле.

Лептоспиры демонстрируют подвижность, напоминающую движение штопора. Пробирки на наличие роста исследуют каждые 5–7 дней. Рост проявляется в виде кольцевой зоны — диска, расположенного на 1–3 см ниже поверхности среды. Отсутствие кольцевой зоны роста не означает обязательного отсутствия лептоспир.

Небольшое количество материала из области диска роста извлекают и исследуют микроскопически. Окраска по Граму для этой цели неудовлетворительна. Микроколонии можно фиксировать метанолом и окрашивать по Гимзе для выявления палочковидных форм.

Требования к образцам и обращение

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным лабораторным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Требования безопасности могут быть приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения

Последовательное исследование образцов, взятых с интервалом не менее 1 дня, повышает вероятность получения положительной культуры, поскольку выделение Leptospira может происходить периодически.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от беловато-жёлтого до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

После добавления сыворотки и раствора гемоглобина приготовленная среда представляет собой прозрачный или слегка опалесцирующий раствор жёлто-коричневого цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 0,342 % мас./об. при 25 °C: pH 7,2 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления инактивированной сыворотки крови и стерильного раствора гемоглобина, после инкубации при 30 °C в течение периода до 2–7 дней.

Технические характеристики

• Назначение изделия: основа
• Масса: 100 г
• Диапазон температуры хранения основы: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C
• Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2

Условия хранения и срок годности

Храните порошок при температуре 10–30 °C в плотно закрытой ёмкости, а приготовленную среду — при 20–30 °C. Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом состоянии, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к комкованию.

Храните продукт в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После использования плотно закрывайте контейнер. Эффективность продукта обеспечивается при использовании в течение указанного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.