Агар со спиртовым голубым HiMedia M445-500G (уп/500 гр)

Питательная диагностическая среда Агар со спиртовым голубым HiMedia M445-500G (уп/500 гр) производства HiMedia для выявления и количественного определения липолитических микроорганизмов, конечный pH среды — 6,8 ± 0,2. Среда применяется для исследования изолированных микроорганизмов из клинических и молочных образцов; для проявления липазной активности требуется добавление липидного субстрата.

Назначение

• Назначение: выявление и количественное определение липолитических микроорганизмов.
• Тип образца: изолированные микроорганизмы из клинических образцов и молочных продуктов.
• Тип питательной среды: диагностическая.
• Назначение изделия: агар.
• Сертификат: ФСЗ 2009/03705.

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Технические характеристики

• Физическая форма: порошок.
• Происхождение: животного происхождения.
• Тип продукта: стандартный.
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE).
• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,60–7,00.
• Реакция: 3,22 % масс./об. водного раствора при 25 °C; pH 6,8 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация результатов

Липиды, включая жиры и масла, являются высоковосстановленными соединениями. При катаболизме липидов может высвобождаться больше пар электронов на грамм вещества и, соответственно, образовываться больше энергии, чем при катаболизме углеводов или белков.

Процесс расщепления липидов обеспечивается ферментом липазой. Микроорганизмы, продуцирующие липазу, относятся к липолитическим. Развитие липазопродуцирующих микроорганизмов может приводить к появлению дефектов вкуса молока и молочных продуктов с высоким содержанием жира. Некоторые свободные жирные кислоты, высвобождаемые липолитическими ферментами, имеют низкий порог восприятия запаха и вкуса и могут придавать продукту прогорклый вкус даже при низкой концентрации.

Агар со спиртовым голубым приготовлен по рецептуре Starr и рекомендован APHA для выявления и количественного определения липолитических микроорганизмов. Это базовая питательная среда, в которую добавляют липидный субстрат для выявления, количественного определения и изучения липолитических микроорганизмов. В ранее применявшихся рецептурах для индикации липолиза использовались красители, которые иногда оказывали ингибирующее действие на микроорганизмы. Starr показал, что спиртовой голубой является инертным индикатором липолиза; результат реакции визуализируется в виде прозрачных зон вокруг колоний.

Триптон и дрожжевой экстракт служат источниками углерода, азота, витаминов и минеральных веществ. Спиртовой голубой — краситель, выполняющий функцию индикатора липолиза.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 32,15 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C в течение 15 мин; давление составляет 15 фунтов, что соответствует примерно 0,103 МПа.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Медленно добавьте 30 мл липазного субстрата при перемешивании, чтобы обеспечить равномерное распределение.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Для корректного проявления активности липазы рекомендуется использовать стеклянные чашки Петри вместо одноразовых пластиковых чашек.

Липидный субстрат

В качестве источника липидов рекомендуются хлопковый жмых, сливки, оливковое масло и другие липазные субстраты.

Для приготовления стабильной эмульсии:

1. Растворите 10 г акации или 1 мл полисорбата 80 в 400 мл тёплой дистиллированной воды.
2. Добавьте 100 мл хлопкового или оливкового масла.
3. Энергично перемешайте для эмульгирования.

Методика проведения анализа

1. Приготовьте разведение исследуемого продукта 1:10 или другое подходящее разведение.
2. Нанесите 0,1 мл выбранного разведения на поверхность приготовленной среды.
3. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 24–48 ч.
4. Интерпретируйте результат по появлению прозрачной зоны и/или интенсивно-синего окрашивания вокруг и под каждой колонией.

Липолитические микроорганизмы образуют вокруг колоний прозрачную зону и/или интенсивное синее окрашивание.

Контроль качества

Внешний вид

• Цвет и состояние: однородный, свободно пересыпающийся порошок от кремового до зеленовато-жёлтого цвета.

Гелеобразование

• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,7 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель синего цвета.
• Среда с добавленным липазным субстратом: слегка опалесцирующий гель лавандового цвета в чашках Петри.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 48–72 ч с добавленным липазным субстратом.

Обозначение * соответствует номерам WDCM.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и подготовки проб согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Ограничения применения

• Отдельные микроорганизмы отличаются требованиями к условиям роста и могут демонстрировать различные варианты роста на среде.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Условия хранения сухой среды: плотно закрытый контейнер.
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.
• После вскрытия необходимо хранить продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон, чтобы предотвратить образование комков вследствие гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Место хранения: сухое, проветриваемое, защищённое от экстремальных температур и источников возгорания.
• После каждого использования контейнер следует плотно закрывать.
• Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение установленного срока годности и при соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Меры предосторожности

• Только для профессионального применения.
• Перед вскрытием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо безопасно утилизировать посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте утверждённые лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.