Основа гоноккокового агара HiMedia M434-500G (уп/500 гр)

Питательная среда — основа гонококкового агара HiMedia M434-500G (уп/500 гр) без ростовых добавок, предназначенная для приготовления селективных сред. Применяется для селективного выделения и культивирования гонококков; для роста требовательных микроорганизмов требует добавления гемоглобина и ростовых добавок.

Назначение

Основа гонококкового агара HiMedia M434-500G предназначена для селективного выделения и культивирования гонококков. Среда может использоваться как основа для приготовления селективных сред с добавлением крови, гемоглобина, витаминных, дрожжевых и антибиотических добавок.

Состав

Состав на 1 л:

Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности среды.

Принцип действия и интерпретация

Большинство гонококковых инфекций представляет собой неосложнённые инфекции нижних отделов половых путей, вызываемые непосредственным инфицированием цилиндрического эпителия слизистых оболочек. Возбудитель гонококковой инфекции — Neisseria gonorrhoeae.

Большинство штаммов Neisseria имеют сложные потребности в питательных веществах. Некоторые штаммы чрезвычайно чувствительны к жирным кислотам, поэтому в питательную среду необходимо включать растворимый крахмал.

Среда, разработанная Johnston, обеспечивала рост Neisseria в течение 24 ч вместо обычных 48 ч. Позднее Carpenter и Morton модифицировали среду добавлением гемоглобина. Thayer и Martin повысили селективность GC-среды введением антибиотиков колистина, ванкомицина и нистатина — селективной добавки V.C.N. (FD023). Позднее к V.C.N. был добавлен лактат триметоприма, что дополнительно повысило селективность среды; соответствующая добавка обозначается V.C.N.T. (FD024).

Для культивирования требовательных микроорганизмов среду следует дополнять необходимыми ростовыми факторами, основным источником которых является дрожжевой экстракт. Дрожжевой экстракт может быть заменён химически определённой витаминной ростовой добавкой (FD025), содержащей необходимые ростовые факторы дрожжевого экстракта. Фактор X, необходимый для роста требовательных видов Haemophilus, поступает из гемоглобина (FD022).

Основа GC-среды может использоваться для приготовления среды Thayer–Martin с добавлением FD027, содержащей автолизат дрожжей как источник необходимых ростовых факторов, и антибиотиков V.C.N.T. как селективных агентов.

В добавке V.C.N.T. (FD024) ванкомицин в концентрации 3 мг/л был заменён линкомицином, поскольку линкомицин оказывает меньшее ингибирующее действие на гонококки. Нистатин был заменён амфотерицином B для повышения селективности среды в отношении дрожжевых контаминантов, регулярно обнаруживаемых в вагинальных образцах. Модифицированная добавка получила название Linco T Supplement (FD026).

Некоторые штаммы гонококков были чувствительны к регулярно применявшемуся ванкомицину в концентрации 3 мг/л. Поэтому концентрацию ванкомицина снизили до 2 мг/л для обеспечения роста чувствительных штаммов. Модифицированная добавка с пониженной концентрацией ванкомицина и амфотерицином B получила название Vanclo T Supplement (FD028).

Специальный пептон в составе GC-агара обеспечивает микроорганизмы необходимыми питательными веществами. Крахмал нейтрализует токсичные метаболиты, образуемые Neisseria. Фосфаты предотвращают изменения pH, связанные с образованием аминов и способные влиять на выживание микроорганизмов. Фактор X (гемин), необходимый для видов Haemophilus, поступает из гемоглобина. Другие добавки обеспечивают фактор V — НАД (никотинамидадениндинуклеотид), необходимый видам Haemophilus, а также аминокислоты, коферменты, ионы железа и другие компоненты, улучшающие рост патогенных видов Neisseria.

Методика приготовления среды

1. Для приготовления основы двойной концентрации суспендируйте 36,0 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Отдельно суспендируйте 10 г ростовой добавки FO Growth Supplement (FD022) в 500 мл очищенной или дистиллированной воды для получения однородного 2%-ного раствора.
4. Стерилизуйте оба раствора отдельно в автоклаве при давлении 15 фунт-сил/дюйм² (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите растворы до 45–50 °C.
6. Равномерно смешайте оба раствора.
7. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое двух флаконов селективной добавки GC Selective Supplement (FD021).
8. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Повышение селективности

Для повышения селективности среды можно добавить одну из антибиотических добавок:

• V.C.N. Supplement (FD023): два флакона на 1 л;
• V.C.N.T. Supplement (FD024): два флакона на 1 л;
• Linco T Supplement (FD026): два флакона на 1 л;
• Vanclo T Supplement (FD028): два флакона на 1 л.

Повышение питательных свойств

Для улучшения питательных свойств среды можно добавить:

• Vitamino Growth Supplement (FD025): два флакона на 1 л;
• Yeast Autolysate Supplement (FD027): два флакона на 1 л.

Приготовление шоколадного кровяного агара

1. Для приготовления среды одинарной концентрации суспендируйте 3,6 г порошка в 100 мл дистиллированной воды.
2. Стерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунт-сил/дюйм² (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
3. Добавьте дефибринированную кровь в концентрации 5 % об./об.
4. Тщательно перемешайте.
5. Нагревайте при 80 °C в течение 10 мин.

Пробоподготовка и посев

Не используйте ватные тампоны для сбора образцов. Выполняйте посев непосредственно после отбора образца.

Образцы следует штриховать по поверхности чашек таким образом, чтобы одни участки поверхности получали высокую посевную нагрузку, а другие — низкую.

Инкубируйте посевы при 37 °C в атмосфере с относительной влажностью 70 % и содержанием диоксида углерода (CO₂) 5–10 %.

Все предположительно идентифицированные как Neisseria микроорганизмы необходимо подтверждать с помощью тестов на ферментацию углеводов и других серологических исследований.

Типы образцов

• Клинические образцы: моча.
• Клинические образцы: отделяемое дыхательных путей.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными лабораторными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Для роста требовательных микроорганизмов, таких как Haemophilus и гонококки, необходимо добавлять ростовые компоненты, включая гемоглобин и витаминные ростовые добавки.
2. Разные микроорганизмы имеют индивиду