HiMedia M434-100G Основа GC агара

Сухая питательная среда HiMedia M434-100G Основа GC агара для селективного выделения и культивирования гонококков. Применяется в микробиологических лабораториях для диагностики инфекций, вызванных Neisseria gonorrhoeae; вес упаковки 100 г.

Принцип измерения и интерпретация

Среда предназначена для выращивания требовательных микроорганизмов, в частности Neisseria gonorrhoeae. Большинство штаммов Neisseria имеют сложные требования к питанию и могут быть чувствительны к жирным кислотам, поэтому в состав среды включен растворимый крахмал для нейтрализации токсичных метаболитов. Фосфаты поддерживают стабильный уровень pH, предотвращая его изменение при производстве аминов.

Основа GC агара служит базой для приготовления среды Тейера-Мартина при добавлении соответствующих антибиотиков и факторов роста. Для обеспечения роста Haemophilus используется гемоглобин (фактор X), а дополнительные добавки обеспечивают подачу фактора V (НАД), аминокислот, коферментов и ионов железа, что улучшает рост патогенных Neisseria.

Состав

Состав, г/л:

Конечный pH (при 25 °C): 7,2 ± 0,2.

Методика приготовления

Приготовление базовой среды (двойной концентрации)

1. Растворите 36,0 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте раствор в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.

Приготовление добавки роста (2% раствор)

1. Растворите 10 г добавки роста FO (FD022) в 500 мл очищенной или дистиллированной воды до получения однородного раствора.
2. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.

Сборка и посев

1. Охладите оба раствора до 45–50 °C.
2. Равномерно смешайте растворы.
3. В асептических условиях добавьте содержимое двух флаконов селективной добавки GC (FD021).
4. Тщательно перемешайте и разлейте по стерильным чашкам Петри.

Приготовление шоколадного кровяного агара

1. Приготовьте среду одинарной концентрации: 3,6 г порошка на 100 мл дистиллированной воды.
2. Стерилизуйте в автоклаве при 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
3. Добавьте 5 % (об/об) дефибринированной крови.
4. Тщательно перемешайте и прогрейте при 80 °C в течение 10 минут.

Область применения и работа с образцами

Среда используется для анализа клинических образцов: мочи, респираторных экссудатов.

Особенности посева и инкубации

• Не используйте ватные тампоны для сбора образцов.
• Посев следует производить немедленно после забора материала.
• Образцы наносят на поверхность агара штрихом так, чтобы были созданы как зоны с высокой, так и с низкой плотностью посева.
• Инкубация проводится при 37 °C в атмосфере с влажностью 70 % и содержанием CO₂ 5–10 %.
• Все предполагаемые культуры Neisseria должны быть подтверждены тестами на ферментацию углеводов и серологическими методами.

Технические характеристики

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до желтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,0 % агаром.
• Цвет и прозрачность: базовая среда представляет собой светло-желтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель. После добавления 2 % гемоглобина образуется непрозрачный гель шоколадно-коричневого цвета.
• Реакция (pH): 7,00–7,40 (3,6 % водный раствор при 25 °C: 7,2 ± 0,2).

Культуральные характеристики

Характеристики определены при инкубации при 35–37 °C в течение 40–48 часов в присутствии 5–10 % CO₂ и влажности 70 %, с добавлением стерильной добавки роста FO (FD022) и селективной добавки GC (FD021).

Совместимость и дополнительные добавки

Для повышения селективности среды могут быть добавлены следующие антибиотики:

• V.C.N. Supplement (FD023): 2 флакона на литр.
• V.C.N.T. Supplement (FD024): 2 флакона на литр.
• Linco T Supplement (FD026): 2 флакона на литр.
• Vanclo T Supplement (FD028): 2 флакона на литр.

Для улучшения питательных свойств:

• Vitamino Growth Supplement (FD025): 2 флакона на литр.
• Yeast Autolysate Supplement (FD027): 2 флакона на литр.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре от +10 до +30 °C. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать бутылку во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников воспламенения.
• Хранение готовой среды: при температуре +2…+8 °C.
• Утилизация: использованные или непригодные препараты подлежат стерилизации в автоклаве или сжиганию в соответствии с правилами работы с инфекционными материалами.

Ограничения применения

1. Для роста требовательных организмов (Haemophilus, Gonococci) обязательно добавление гемоглобина и добавок Vitamino.
2. Различные организмы могут демонстрировать разный характер роста в зависимости от своих индивидуальных потребностей.
3. Рекомендуется проводить валидацию среды для конкретных микроорганизмов, не указанных в сертификате анализа (COA).
4. Для окончательной идентификации рекомендуется биохимическая характеристика чистой культуры.