HiMedia M434-100G Основа GC агара

Основа питательной среды HiMedia M434-100G Основа GC агара для селективного выделения и культивирования гонококков, масса продукта 100 г. Применяется для выращивания Neisseria и других требовательных микроорганизмов; для роста гонококков и Haemophilus требует добавления ростовых и селективных добавок.

Назначение

Основа GC агара предназначена для селективного выделения и культивирования гонококков.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия установленным показателям эффективности.

Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 36,0 г основы в 500 мл очищенной или дистиллированной воды для получения основы двойной концентрации.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Отдельно суспендируйте 10 г добавки для роста FO (FD022) в 500 мл очищенной или дистиллированной воды для приготовления однородного 2%-ного раствора.
4. Стерилизуйте оба раствора отдельно в автоклаве при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,1034 МПа; ≈1,034 бар) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите растворы до 45–50 °C.
6. Равномерно смешайте оба раствора.
7. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое двух флаконов селективной добавки GC (FD021).
8. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Повышение селективности

Для повышения селективности среды могут добавляться следующие антибиотические добавки:

• добавка V.C.N. (FD023) — два флакона на литр;
• добавка V.C.N.T. (FD024) — два флакона на литр;
• добавка Linco T (FD026) — два флакона на литр;
• добавка Vanclo T (FD028) — два флакона на литр.

Повышение питательных свойств

Для усиления питательных свойств среды могут добавляться:

• витаминная добавка для роста (FD025) — два флакона на литр;
• добавка автолизата дрожжей (FD027) — два флакона на литр.

Приготовление шоколадного кровяного агара

1. Приготовьте среду одинарной концентрации, растворив 3,6 г основы в 100 мл дистиллированной воды.
2. Стерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,1034 МПа; ≈1,034 бар) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
3. Добавьте дефибринированную кровь в количестве 5 % об./об.
4. Тщательно перемешайте.
5. Нагревайте при 80 °C в течение 10 мин.

Принцип действия и интерпретация

Большинство гонококковых инфекций представляет собой неосложнённые инфекции нижних отделов половых путей, вызванные прямым инфицированием цилиндрического эпителия слизистых оболочек. Возбудителем гонококковых инфекций является Neisseria gonorrhoeae.

Большинство штаммов Neisseria имеют сложные требования к условиям роста. Некоторые штаммы обладают высокой чувствительностью к жирным кислотам, поэтому в питательную среду необходимо включать растворимый крахмал.

Среда GC позволяет получить рост Neisseria в течение 24 ч вместо обычных 48 ч. Среда была модифицирована добавлением гемоглобина. Для повышения селективности среды Thayer–Martin в неё были включены антибиотики колистин, ванкомицин и нистатин — добавка V.C.N. (FD023). Позднее для дальнейшего повышения селективности к V.C.N. был добавлен лактат триметоприма — добавка V.C.N.T. (FD024).

Для культивирования требовательных микроорганизмов среду следует дополнять необходимыми факторами роста, основным источником которых является дрожжевой экстракт. Дрожжевой экстракт можно заменить химически определённой витаминной добавкой для роста (Twin Pack) (FD025), содержащей необходимые факторы роста, доступные из дрожжевого экстракта. Фактор X, необходимый для роста требовательных видов Haemophilus, обеспечивается гемоглобином (FD022).

Основа GC среды может использоваться для приготовления среды Thayer–Martin путём добавления FD027, содержащей автолизат дрожжей как источник необходимых факторов роста, и антибиотиков V.C.N.T. как селективных агентов.

В добавке V.C.N.T. (FD024) ванкомицин в концентрации 3 мг/л был заменён линкомицином, поскольку линкомицин оказывает меньшее ингибирующее действие на гонококки. Нистатин был заменён амфотерицином B (в FD024) для повышения селективности среды в отношении дрожжевых загрязнителей, регулярно выявляемых в вагинальных образцах.

Модифицированная добавка получила название Linco T (FD026). Некоторые штаммы гонококков оказались чувствительными к регулярно применяемому ванкомицину в концентрации 3 мг/л. Поэтому концентрацию ванкомицина снизили до 2 мг/л для обеспечения роста чувствительных штаммов. Эта модифицированная добавка с пониженной концентрацией ванкомицина и амфотерицином B получила название Vanclo T (FD028).

GC агар содержит специальный пептон, обеспечивающий микроорганизмы необходимыми питательными веществами. Крахмал нейтрализует токсичные метаболиты, образующиеся Neisseria. Фосфаты предотвращают изменения pH, вызванные образованием аминов и способные влиять на выживание микроорганизмов. Фактор X, или гемин, необходимый для роста видов Haemophilus, обеспечивается гемоглобином. Другие добавляемые компоненты обеспечивают фактор V — НАД (никотинамид-адениндинуклеотид) для видов Haemophilus, а также аминокислоты, коферменты, ионы железа и другие вещества, улучшающие рост патогенных Neisseria.

Работа с образцами

Тип образца

Клинические образцы:

• моча;
• отделяемое дыхательных путей.

Сбор и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами используйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами.

Не используйте ватный тампон для сбора образцов. Выполняйте посев непосредственно после сбора образца.

Образцы следует штрихом наносить на поверхность чашек таким образом, чтобы одни участки были обильно засеяны, а другие — слегка.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Условия инкубации

Инкубируйте посевы при 37 °C в атмосфере с относительной влажностью 70 % и содержанием диоксида углерода 5–10 %.

Все предположительно относящиеся к Neisseria изоляты необходимо подтверждать с помощью тестов на ферментацию углеводов и других серологических тестов.

Технические характеристики

• Назначение изделия: основа.
• Масса: 100 г.
• Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.
• pH 3,6%-ного водного раствора при 25 °C: 7,2 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,00–7,40.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,0%-ным агаровым