HiMedia M417-500G Агар для витамина B12

Агаризованная питательная среда HiMedia M417-500G Агар для витамина B12 представляет собой сухой порошок массой 500 г для приготовления агаровой среды. Применяется для микробиологического определения витамина B12 с использованием Lactobacillus leichmannii ATCC 4797 чашечным или дисковым методом.

Назначение

Vitamin B12 Agar предназначен для микробиологического анализа витамина B12 с использованием Lactobacillus leichmannii ATCC 4797 чашечным или дисковым методом.

Состав

Количество компонентов указано в г/л.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных показателей эффективности.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 88,62 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип и интерпретация анализа

Vitamin B12 Agar представляет собой обезвоженную среду без витамина B12, содержащую все питательные вещества, необходимые для роста Lactobacillus leichmannii ATCC 4797.

Добавление витамина B12 в заданных возрастающих концентрациях вызывает ростовую реакцию. Реакцию оценивают по диаметру зоны роста вокруг диска или чашечки, содержащих витамин B12.

Посевную суспензию для анализа готовят пересевом из маточной культуры, предварительно полученной посевом уколом. Для анализа рекомендуется использовать свежепересеянные микроорганизмы, инкубированные при 37 °C в течение 24 ч, после чего культуру центрифугируют, промывают и суспендируют в 10 мл физиологического раствора.

Полученную ростовую реакцию измеряют турбидиметрически или ацидиметрически.

Методика количественного определения

Строят стандартную кривую, откладывая оптическую плотность в зависимости от концентрации витамина B12. Концентрацию витамина B12 в исследуемой пробе рассчитывают на основании стандартной кривой.

При чашечном варианте анализа диаметр зоны роста вокруг чашечки увеличивается пропорционально увеличению концентрации витамина B12 в чашечке.

Для построения стандартной кривой зависимости концентрации и ответной реакции:

1. Подготовьте стандартные концентрации витамина B12.
2. Внесите стандартные растворы в соответствующие пробирки, диски или чашечки.
3. Получите показания ростовой реакции.
4. Постройте стандартную кривую, откладывая показания реакции в зависимости от количества стандарта в каждой пробирке, на каждом диске или в каждой чашечке.
5. Определите количество витамина на каждом уровне исследуемого раствора методом интерполяции по стандартной кривой.

Контроль загрязнения и требования к культуре

Необходимо принимать особые меры для предотвращения загрязнения среды или стеклянной посуды, используемой при анализе.

• Стеклянная посуда должна быть чистой и не содержать моющих средств.
• Даже небольшое загрязнение посторонними материалами может привести к ошибочным результатам.
• Тест-организм, используемый для инокуляции, необходимо культивировать и поддерживать на средах, рекомендованных для этой цели.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный порошок от почти белого до жёлтого цвета, склонный к образованию мягких комков, которые легко разрушаются до порошкообразного состояния.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция среды

Реакция 8,8%-ного водного раствора по массе при 25 °C: pH 6,2 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,00–6,40.

Рост

Хороший рост наблюдается вокруг чашечек, содержащих витамин B12; диаметр зоны роста увеличивается пропорционально повышению концентрации витамина B12 в чашечке.

Культуральная характеристика

Микробиологический анализ витамина B12 для среды M417 проводят с использованием Lactobacillus leichmanii ATCC 4797 после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения: ниже 8 °C.
• Рекомендуется хранить в эксикаторе.
• Использовать свежеприготовленную среду.
• Использовать до даты истечения срока годности, указанной на этикетке.
• Температурный режим, указанный для товара в каталоге: 2–8 °C.