HiMedia M417-500G Агар для витамина B12

Сухая питательная среда HiMedia M417-500G Агар для витамина B12, предназначенная для микробиологического анализа содержания витамина B12. Применяется с использованием тест-штамма Lactobacillus leichmannii ATCC 4797 методом чашек с лунками или дисками.

Принцип измерения

Агар для витамина B12 представляет собой дегидратированную среду, которая не содержит витамина B12, но включает все необходимые питательные вещества для роста Lactobacillus leichmannii ATCC 4797. При внесении витамина B12 в заданных возрастающих количествах наблюдается рост микроорганизмов, который оценивается по диаметру зоны роста вокруг диска или лунки, содержащей витамин. Результаты анализа измеряются турбидиметрически или ацидиметрически.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

Для анализа рекомендуется использовать свежепересеянные организмы, полученные из стоковой культуры методом укольного посева. Культуры инкубируют при 37 °C в течение 24 часов, затем центрифугируют, промывают и суспендируют в 10 мл физиологического раствора.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 88,62 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Процедура анализа и интерпретация

1. В среду вносятся определенные количества витамина B12 (в лунки или на диски).
2. После инкубации измеряется диаметр зоны роста.
3. Строится стандартная кривая зависимости абсорбции (отклика) от концентрации витамина B12.
4. Концентрация витамина B12 в исследуемом образце рассчитывается путем интерполяции по стандартной кривой.

Требования к оборудованию и чистоте

Необходимо строго избегать загрязнения среды или стеклянной посуды. Следует использовать чистую посуду, очищенную от остатков моющих средств, так как даже незначительное загрязнение посторонними веществами может привести к ошибочным результатам. Тест-организм должен культивироваться и храниться на рекомендованных для этой цели средах.

Технические характеристики

Состав, г/л:

• Конечный pH (при 25 °C): 6,2 $\pm$ 0,2
• Вес: 500 г

Дополнительные параметры

Контроль качества

• Внешний вид: однородный порошок от почти белого до желтого цвета, склонный к образованию мягких комков, которые легко разбиваются в порошок.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
• Реакция: pH 8,8 % (масса/объем) водного раствора при 25 °C составляет 6,2 $\pm$ 0,2.
• Диапазон pH: 6,00–6,40.
• Рост: наблюдается хороший рост вокруг лунок с витамином B₁₂, при этом диаметр зоны роста увеличивается пропорционально концентрации витамина.

Культуральный отклик

Микробиологический анализ витамина B₁₂ проводится с использованием Lactobacillus leichmannii ATCC 4797 после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения: от +2 до +8 °C.
• Особенности: рекомендуется хранить в эксикаторе.
• Использование: использовать свежеприготовленную среду до истечения срока годности, указанного на этикетке.