HiMedia M417-100G Агар для витамина B12

Питательная агаризованная среда HiMedia M417-100G Агар для витамина B12 предназначена для микробиологического анализа витамина B12 с использованием Lactobacillus leichmannii ATCC 4797. Среда применяется в чашечном или дисковом методе и поставляется в виде порошка массой 100 г для приготовления свежей рабочей среды.

Назначение

Vitamin B12 Agar используют для микробиологического анализа витамина B12 с применением Lactobacillus leichmannii ATCC 4797 по чашечному или дисковому методу.

Состав

Состав рассчитан на приготовление 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Конечный pH при 25 °C: 6,2 ± 0,2.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 88,62 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов (примерно 0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип анализа и интерпретация результатов

Vitamin B12 Agar представляет собой обезвоженную среду, не содержащую витамин B12, но включающую все питательные вещества, необходимые для роста Lactobacillus leichmannii ATCC 4797.

Внесение витамина B12 в заданных возрастающих концентрациях вызывает рост культуры, который оценивают по диаметру зоны роста вокруг диска или лунки, содержащих витамин B12. Посевной материал для анализа готовят путём пересевания культуры из маточной культуры, предварительно полученной методом посева уколом.

Для анализа рекомендуется использовать свежепересеянную культуру, инкубированную при 37 °C в течение 24 ч, затем центрифугированную, отмытую и суспендированную в 10 мл физиологического раствора.

Полученную реакцию роста измеряют турбидиметрическим или ацидиметрическим методом.

Методика количественного определения

Строят стандартную кривую, откладывая значение оптической плотности в зависимости от концентрации витамина B12. Концентрацию витамина B12 в исследуемой пробе рассчитывают по стандартной кривой.

При оценке роста вокруг лунок, содержащих витамин B12, диаметр зоны роста увеличивается пропорционально повышению концентрации витамина B12 в лунке.

Для построения стандартной концентрационно-ответной кривой показания отклика откладывают в зависимости от количества стандарта в каждой пробирке, на каждом диске или в каждой лунке. Количество витамина на каждом уровне анализируемого раствора определяют интерполяцией по стандартной кривой.

Требования к чистоте и пробоподготовке

Необходимо исключить загрязнение среды и стеклянной посуды, используемой для анализа. Следует применять чистую стеклянную посуду, не содержащую остатков моющих средств. Даже небольшое количество постороннего загрязнения может привести к ошибочным результатам.

Тест-организм, используемый для инокуляции, необходимо культивировать и поддерживать на средах, рекомендованных для этой цели.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный порошок от почти белого до жёлтого цвета, склонный к образованию мягких комков, которые легко разрушаются до порошкообразного состояния.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция среды

Реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 8,8 % при 25 °C.

pH: 6,2 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,00–6,40.

Рост

Хороший рост наблюдается вокруг лунок, содержащих витамин B12; диаметр зоны роста увеличивается пропорционально повышению концентрации витамина B12 в лунке.

Культуральная характеристика

Микробиологический анализ витамина B12 проводят с использованием Lactobacillus leichmanii ATCC 4797 после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

Условия хранения и срок годности

Хранить при температуре ниже 8 °C, предпочтительно в эксикаторе. Использовать свежеприготовленную среду. Применять до даты истечения срока годности, указанной на этикетке.

Комплект поставки

• Обезвоженная агаризованная среда Vitamin B12 Agar HiMedia M417-100G, 100 г, в стеклянном флаконе.