Основа агара для выявления фенилкетонурии с тиениаланином HiMedia M398-500G (уп/500 гр)

Диагностическая основа агара для выявления фенилкетонурии с тиениаланином HiMedia M398-500G (уп/500 гр). Применяется для оценки содержания фенилаланина в крови и моче с целью раннего выявления фенилкетонурии (ФКУ); сертификат ФСЗ 2009/03707.

Принцип измерения

Фенилкетонурия представляет собой врожденный дефект, вызванный отсутствием фермента фенилаланингидроксилазы, что приводит к накоплению фенилаланина в крови и его экскреции с мочой.

Метод основан на модифицированном анализе ингибирования (тест Гаттри): рост бактерий Bacillus subtilis обычно подавляется в присутствии β-2-тиениаланина. Однако при добавлении L-фенилаланина в среду происходит нейтрализация β-2-тиениаланина, что позволяет бактериям расти. По размеру зон роста вокруг образцов определяют уровень аминокислоты в крови или уровень фенилпировинной кислоты в моче.

Методика проведения анализа

Пробоподготовка и сбор образцов

В качестве клинического материала используется моча или кровь. Для анализа используются небольшие фильтровальные бумажные диски, насыщенные кровью пациента.

Процедура анализа

1. На поверхность агара PKU Test Agar с β-2-тиениаланином, инокулированного спорами Bacillus subtilis, помещают фильтровальные диски с кровью пациента.
2. Рядом размещают контрольные диски, пропитанные L-фенилаланином с известными концентрациями: 2, 4, 6, 8, 10, 12 и 20 мг%.
3. Образцы инкубируют в течение ночи.
4. После инкубации визуально оценивают зоны роста вокруг бумажных дисков и сравнивают их с зонами вокруг контрольных дисков.

Интерпретация результатов

Результат считается предварительно положительным, если зона роста вокруг диска пациента сопоставима с зоной контроля 4 мг%. При необходимости результаты подтверждаются дублирующим тестом или химическим/спектрофлуориметрическим методом.

Приготовление среды

1. Суспендировать 50,06 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. ВНИМАНИЕ: Не автоклавировать и не перегревать среду.
4. Охладить до 45–50 °C и добавить споры Bacillus subtilis.
5. Тщательно перемешать и разлить по стерильным чашкам Петри.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,0 $\pm$ 0,2

Общие параметры

• Внешний вид: однородный свободнотекущий порошок от кремового до зеленовато-желтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-желтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 12–16 ч.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C.
• Хранение готовой среды: при температуре 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

• Только для диагностики in vitro и профессионального использования.
• При работе использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица.
• Утилизация: использованные или непригодные препараты подлежат безопасному удалению путем автоклавирования и/или сжигания в соответствии с лабораторными правилами работы с инфекционными материалами.