Основа декарбоксилазного бульона HiMedia M393-100G (уп/100 гр)

Дифференциальная питательная среда Основа декарбоксилазного бульона HiMedia M393-100G (уп/100 гр) производства HiMedia. Применяется для дифференциации бактерий из клинических и неклинических образцов на основе их способности декарбоксилировать L-аминокислоты.

Принцип измерения

Основа декарбоксилазного бульона по Мюллеру используется для дифференциации грамотрицательных энтеробактерий. В состав среды входят пептон и HM-пептон B, обеспечивающие азот, углерод, длинноцепочечные аминокислоты и другие питательные вещества. Декстроза служит ферментируемым углеводом, а пиридоксаль выступает кофактором фермента декарбоксилазы.

В качестве индикаторов pH используются бромкрезоловый пурпурный и крезоловый красный. При инокуляции бактериями, ферментирующими декстрозу, pH среды снижается из-за образования кислоты, и цвет индикатора меняется с пурпурного на жёлтый. Образовавшаяся кислота стимулирует работу фермента декарбоксилазы.

В результате декарбоксилирования образуются амины:

• из лизина — кадаверин;
• из орнитина — путресцин;
• из аргинина (после предварительного гидролиза до орнитина) — путресцин.

Образование этих аминов повышает pH среды, что возвращает индикатору пурпурный цвет. Если микроорганизм не вырабатывает соответствующий фермент, среда остаётся кислой и жёлтой.

Методика проведения анализа

1. Приготовление среды: 10,52 г порошка суспендировать в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Добавление субстрата: добавить 10 г L-лизина, L-аргинина, L-орнитина или других L-аминокислот. При использовании DL-аминокислот концентрация должна составлять 2 %.
3. Растворение: при необходимости нагреть до полного растворения компонентов. При добавлении L-орнитина требуется повторная корректировка pH.
4. Розлив и стерилизация: разлить по 5 мл в пробирки с завинчивающимися крышками и стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C и давлении ≈0,1 МПа (15 lbs) в течение 10 минут.
5. Инокуляция: внести исследуемый изолят в пробирку с соответствующей аминокислотой. Параллельно каждый изолят должен быть инокулирован в контрольную пробирку основы бульона без добавления аминокислоты.
6. Изоляция от воздуха: поверхность среды в инокулированных пробирках необходимо закрыть слоем стерильного минерального масла. Контакт с воздухом может привести к защелачиванию поверхности, что сделает результат теста недостоверным.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Область применения

Среда предназначена для анализа следующих типов образцов:

• Клинические образцы (кровь);
• Образцы пищевых продуктов и молочной продукции;
• Пробы воды.

Культуральные характеристики

Характеристики определяются после инкубации при 35–37 °C в течение до 4 суток с добавлением соответствующих аминокислот и созданием масляной пробки из стерильного минерального масла.

Ограничения и предостережения

• Некоторые требовательные (fastidious) организмы могут демонстрировать замедленную реакцию.
• Для получения корректных результатов обязательно использование слоя минерального масла.
• Среда предназначена только для профессионального использования в целях диагностики in vitro.
• При работе с клиническими образцами следует соблюдать стандартные меры предосторожности и правила микробиологической безопасности.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом месте, защищённом от источников возгорания и экстремальных температур. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать бутылку для предотвращения комкования.
• Хранение готовой среды: при температуре 15–30 °C.
• Утилизация: использованные или непригодные препараты должны быть подвергнуты автоклавированию или инсинерации в соответствии с лабораторными протоколами по обращению с инфекционными материалами.