Питательная среда Основа угольного агара для бордетелл HiMedia M344-500G (уп/500 гр) — порошковая агаровая основа для приготовления селективной среды. Применяется для культивирования Bordetella pertussis при производстве вакцин и поддержания лабораторных культур; рабочая среда готовится с добавлением 10 % крови и селективной добавки FD004.

Назначение

Основа угольного агара предназначена для культивирования Bordetella pertussis при производстве вакцин, а также для поддержания запасных лабораторных культур микроорганизмов.

• Назначение изделия: агаровая основа
• Форма выпуска: порошок
• Сертификат: ФСЗ 2009/03706
• Тип продукта: стандартный
• Происхождение: животное
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)

Состав

Массовая концентрация компонентов приведена в г/л:

** Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия установленным параметрам эффективности.

Эквивалентно настою из бычьего сердца.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 31,25 г порошка в 450 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (примерно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте стерильную дефибринированную кровь в количестве 10 % и регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки для бордетелл Bos (FD004).
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Для культивирования видов Haemophilus среду можно преобразовать в шоколадный агар.

Принцип и интерпретация

Род Bordetella включает четыре вида: Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, Bordetella bronchiseptica и Bordetella avium. Генетические исследования показали, что эти микроорганизмы очень близки между собой.

Человек является единственным хозяином для B.pertussis и B.parapertussis, тогда как B.bronchoseptica встречается у широкого круга животных и иногда выявляется у человека. B.avium обнаруживается у птиц.

Виды Bordetella являются облигатными аэробами и метаболически малоактивны. За исключением B.bronchoseptica, они неподвижны. B.pertussis — основная причина коклюша, или коклюшной инфекции. B.parapertussis связан с более лёгкой формой заболевания.

Для первичного выделения B.pertussis особенно важно присутствие угля и 15–20 % крови, нейтрализующих ингибирующие рост эффекты. Для выделения этого микроорганизма требуется обогащённая среда.

Угольный агар приготовлен по методу Mishulow, Sharpe and Cohen. Среда может использоваться вместо агара Борде—Жангу для выделения B. pertussis и производства вакцин против B.pertussis. Угольный агар с добавлением лошадиной крови также применяют для культивирования и выделения Haemophilus influenzae.

Сложность выделения Bordetella pertussis из носоглоточного секрета связана с подавлением нежелательной микрофлоры в течение длительной инкубации на питательных средах. Для ограничения роста других микроорганизмов в среду можно добавлять пенициллин как антимикробный агент. Однако устойчивые к пенициллину представители микрофлоры по-прежнему вызывают контаминацию. Метициллин оказался эффективнее пенициллина для подавления нежелательной носоглоточной микрофлоры. По данным Sutcliffe and Abbott, цефалексин превосходил метициллин по этому показателю.

Настой HM B, пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают микроорганизмы необходимыми питательными веществами. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс. Растворимый крахмал и уголь нейтрализуют токсичные для видов Bordetella вещества, в частности жирные кислоты.

Уголь имеет тенденцию оседать на дне колбы. Поэтому перед разливом следует осторожно вращать колбы, чтобы получить однородную суспензию угля.

Исследуйте чашки после 40 ч инкубации, а затем проводите осмотр дважды в сутки. На чашках наблюдаются небольшие блестящие серовато-белые колонии видов Bordetella округлой формы с закруглёнными краями. Результаты необходимо подтвердить методом DFA — прямого иммунофлуоресцентного анализа. Для более ранней диагностики прямой иммунофлуоресцентный анализ проводят непосредственно на секрете.

Тип образца

• Носовые мазки

Сбор и обращение с образцами

1. Собирайте носовые мазки на ранней стадии заболевания.
2. Поместите мазки в пробирки с угольной агаровой основой половинной концентрации, дополненной 10 % об./об. лизированной дефибринированной лошадиной кровью и селективной добавкой для бордетелл Bos (FD004).
3. Обильно инокулируйте мазки на толстый слой угольной агаровой основы, содержащей 10 % об./об. крови и селективную добавку для бордетелл Bos (FD004).
4. Дополнительно может использоваться неселективная среда без FD004.
5. Верните мазок в исходную транспортную среду и храните при комнатной температуре.
6. Инкубируйте чашки при 35 °C во влажной атмосфере с относительной влажностью 60–70 % в течение до 6 суток.
7. После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте надлежащие правила микробиологической лабораторной практики.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения

1. При разливе осторожно вращайте колбу для получения однородной суспензии угля.
2. Подтверждайте результаты методом DFA — прямого