HiMedia M344-100G Основа агара с активированным углем

Основа агара с активированным углем HiMedia M344-100G предназначена для культивирования Bordetella pertussis, производства вакцин и поддержания чистых культур. Среда используется для выделения возбудителей коклюша из назофарингеальных секретов; вес упаковки составляет 100 г.

Область применения

Рекомендуется для выращивания Bordetella pertussis, а также для производства вакцин и поддержания стоковых культур. При добавлении конской крови среда может быть использована для культивирования и изоляции Haemophilus influenzae.

Принцип измерения и интерпретация

Род Bordetella включает четыре вида: Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, Bordetella bronchiseptica и Bordetella avium. Виды Bordetella являются облигатными аэробами и обладают низкой метаболической активностью.

Для первичной изоляции B. pertussis требуется обогащенная среда с добавлением активированного угля и 15–20 % крови для нейтрализации ингибирующих рост факторов. Данная основа может использоваться в качестве замены агара Борде-Генгу (Bordet-Gengou) для изоляции B. pertussis и производства соответствующих вакцин.

Компоненты среды выполняют следующие функции:

• Инфузия HM B, пептон, дрожжевой экстракт: обеспечивают основные питательные вещества.
• Хлорид натрия: поддерживает осмотический баланс.
• Растворимый крахмал и активированный уголь: нейтрализуют токсичные для Bordetella вещества, такие как жирные кислоты.

Методика приготовления и анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 31,25 г порошка в 450 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 10 % стерильной дефибринированной крови и содержимое одной виалы селективной добавки Bos Selective Supplement (FD004).
6. Тщательно перемешайте и разлейте по стерильным чашкам Петри. Примечание: Для выделения видов Haemophilus среду можно преобразовать в шоколадный агар.

Сбор и обработка образцов

• Тип образца: Назальные мазки.
• Процедура: Мазки собирают на ранней стадии заболевания и помещают в пробирки с полусильной основой агара с активированным углем, дополненной 10 % (об/об) лизированной дефибринированной конской кровью и добавкой Bos Selective Supplement (FD004).
• Посев: Мазки обильно инокулируют на толстый слой основы агара с активированным углем (10 % крови и добавка FD004). Дополнительно может быть использована неселективная среда (без FD004).
• Инкубация: Чашки инкубируют при 35 °C во влажной атмосфере (влажность 60–70 %) до 6 суток.

Анализ результатов

Осмотр чашек проводят через 40 часов инкубации, далее — дважды в день. Колонии видов Bordetella выглядят как маленькие, блестящие, серовато-белые, круглые. Результаты подтверждают методом прямой иммунофлуоресценции (DFA).

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,3 $\pm$ 0,2

Общие параметры

Контроль качества

• Внешний вид: Серый или серовато-черный гомогенный свободный порошок.
• Желирование: Плотный гель, сопоставим с 1,8 % агаром.
• Цвет и прозрачность: Черный непрозрачный гель с нерастворенными черными частицами в чашках Петри.
• pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при добавлении стерильной дефибринированной крови и селективной добавки Bos Selective Supplement (FD004) после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: При температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать бутылку для предотвращения образования комков. Хранить в сухом проветриваемом месте, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.
• Хранение готовой среды: При температуре 2–8 °C.
• Утилизация: Использованные или непригодные препараты должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации согласно лабораторным протоколам работы с инфекционными материалами.

Ограничения и предостережения

1. При разливе среды осторожно встряхивайте колбу для получения однородной суспензии активированного угля.
2. Результаты выделения должны быть подтверждены методом прямой иммунофлуоресценции (DFA).
3. Только для диагностики in vitro и профессионального использования.
4. При работе с образцами использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица) и соблюдать правила микробиологической безопасности.