Порошкообразная основа питательной среды HiMedia M344-100G Основа агара с активированным углем, фасовка 100 г. Применяется для культивирования Bordetella pertussis, производства вакцин и поддержания запасных культур; для первичного выделения B. pertussis требуется добавление угля и 15–20 % крови.

Назначение

Основа агара с активированным углём предназначена для приготовления среды культивирования Bordetella pertussis. Среда также применяется для производства вакцин и поддержания запасных культур.

Среду можно использовать как замену агару Борде — Жангу для выделения B. pertussis и производства вакцин против B. pertussis. Среда с добавлением крови лошади также пригодна для культивирования и выделения Haemophilus influenzae.

Состав

Номинальный состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Эквивалент настоя из говяжьего сердца.

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: M344-100G
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Физическая форма: порошок
• Происхождение: животное
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности)
• Масса: 100 г
• Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,10–7,50

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 31,25 г порошка в 450 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте стерильную дефибринированную кровь в количестве 10 % и регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки Bos Selective Supplement (FD004).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Для видов Haemophilus среду можно преобразовать в шоколадный агар.

Активированный уголь оседает на дне колбы, поэтому перед разливом необходимо осторожно вращать колбы для получения равномерной суспензии угля.

Принцип действия и интерпретация

Род Bordetella включает четыре вида: Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, Bordetella bronchiseptica и Bordetella avium. Генетические исследования показывают, что эти микроорганизмы очень близки друг к другу.

Человек является единственным хозяином B. pertussis и B. parapertussis. B. bronchiseptica встречается у широкого спектра животных и иногда обнаруживается у человека. B. avium встречается у птиц.

Виды Bordetella являются облигатными аэробами и характеризуются низкой метаболической активностью. Они неподвижны, за исключением B. bronchiseptica. B. pertussis — основная причина коклюша. B. parapertussis связан с более лёгкой формой заболевания.

Для первичного выделения, особенно B. pertussis, требуется добавление угля и 15–20 % крови для нейтрализации ингибирующего действия компонентов среды на рост микроорганизмов. Выделение этого микроорганизма требует обогащённой среды.

Основа агара с активированным углём приготовлена по методу Mishulow, Sharpe и Cohen. Добавление активированного угля и растворимого крахмала нейтрализует токсичные для видов Bordetella вещества, включая жирные кислоты.

Компоненты среды выполняют следующие функции:

• настой HM B, пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают микроорганизмы необходимыми питательными веществами;
• хлорид натрия поддерживает осмотический баланс;
• растворимый крахмал и активированный уголь нейтрализуют вещества, токсичные для видов Bordetella.

Чашки Петри исследуют после инкубации в течение 40 ч, а затем дважды в сутки. На чашках наблюдаются небольшие блестящие серовато-белые круглые колонии Bordetella с закруглёнными краями.

Результаты необходимо подтвердить методом прямого флуоресцентного определения антител (DFA). Для более ранней диагностики прямое флуоресцентное определение антител проводят непосредственно в выделениях.

Тип образца

• Носовые мазки.

Сбор и обращение с образцами

1. Соберите носовые мазки на ранней стадии заболевания.
2. Поместите мазки в пробирки с основой агара с активированным углём половинной концентрации, дополненной дефибринированной лошадиной кровью, лизированной в количестве 10 % об./об., и селективной добавкой Bos Selective Supplement (FD004).
3. Обильно инокулируйте мазки на толстый слой основы агара с активированным углём, содержащей 10 % об./об. крови и селективную добавку Bos Selective Supplement (FD004).
4. Дополнительно можно использовать неселективную среду без FD004.
5. Верните мазок в исходную транспортную среду и выдерживайте при комнатной температуре.
6. Инкубируйте чашки при 35 °C во влажной атмосфере с относительной влажностью 60–70 % в течение до 6 суток.
7. После использования загрязнённые материалы перед утилизацией необходимо стерилизовать автоклавированием.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от серого до серовато-чёрного цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,8%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется чёрный непрозрачный гель с нерастворившимися чёрными частицами.
• Реакция: реакция 6,25%-ного водного раствора, измеренная при 25 °C; pH 7,3 ± 0,2.
• pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч; в среду добавляют стерильную дефибринированную кровь и селективную добавку Bos Selective Supplement (FD004).

• Соответствующие номера WDCM.

Ограничения применения

1. Перед разливом осторожно вращайте колбу для получения равномерной суспензии активированного угля.
2. Подтверждайте результаты методом прямого флуоресцентного определения антител (DFA).

При выделении Bordetella pertussis из носоглоточных выделений необходимо подавлять рост сопутствующей микрофлоры в течение длительной инкубации на питательной среде. Для ограничения роста других загрязняющих микроорган