HiMedia M339F-500G Модифицированный ацетатный дифференциальный агар

Дифференциальная агаровая питательная среда HiMedia M339F-500G Модифицированный ацетатный дифференциальный агар с химически определённым составом и конечным pH 6,70 ± 0,2. Среда предназначена для дифференциации видов Shigella и Escherichia coli по утилизации ацетата; отдельные штаммы Escherichia coli могут медленно использовать ацетат или не использовать его, что приводит к ложноотрицательной реакции.

Назначение

Модифицированный ацетатный дифференциальный агар M339F предназначен для дифференциации видов Shigella от Escherichia coli в соответствии с Бактериологическим аналитическим руководством FDA, 2017.

Тип образца: выделенный микроорганизм.

Технические характеристики

• Назначение изделия: агаровая питательная среда
• Состав: химически определённый
• Физическая форма: порошок
• Масса: 500 г
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: флакон из полиэтилена высокой плотности (HDPE)
• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C
• Конечный pH при 25 °C: 6,70 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,50–6,90
• Концентрация водного раствора для контроля реакции: 2,92 % масс./об. при 25 °C

Состав

Количество компонентов указано в г/л.

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эксплуатационных характеристик.

Принцип действия и интерпретация результатов

Шигеллёз обычно рассматривается как заболевание, передаваемое через воду, однако заболевание также передаётся через пищу и преимущественно поражает человека. Распространение возможно от человека к человеку через работников пищевой отрасли при недостаточном соблюдении правил личной гигиены.

Escherichia coli широко распространена в кишечнике человека и является важным факультативным анаэробом, присутствующим в ободочной кишке здорового человека.

Среда «Модифицированный ацетатный дифференциальный агар» предназначена для дифференциации видов Shigella от Escherichia coli в соответствии с Бактериологическим аналитическим руководством FDA, 2017.

Среда разработана Trabulsi и Ewing путём модификации цитратной среды Simmons. Большинство бактерий способны использовать цитрат и ацетат как источники углерода для роста в присутствии органического азота, но не в его отсутствии. Различия в способности к росту используются для дифференциации Shigella от близкородственных микроорганизмов, включая Escherichia coli.

Escherichia coli хорошо растёт на этой среде в течение 24–48 ч; рост сопровождается образованием синей окраски. Сульфат магния является необходимым ионом. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие, а фосфаты поддерживают значение pH.

Утилизация ацетата определяется по образованию синей окраски. Окраска возникает вследствие использования ацетата натрия и последующего формирования щелочной реакции, выявляемой индикатором бромтимоловым синим. Shigella даёт отрицательную реакцию и не образует синей окраски, тогда как Escherichia coli даёт положительную реакцию.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 29,28 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Распределите среду по пробиркам в объёме, достаточном для формирования столбика и скошенной части.
4. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов/дюйм² (ориентировочно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки в наклонном положении.

Подготовка образца и проведение анализа

1. Асептически внесите 25 г образца в 225 мл основы бульона для шигелл с добавлением новобиоцина.
2. Инкубируйте ёмкости в анаэробных условиях при 44,0 °C на водяной бане в течение 20 ч.
3. Выполните дальнейший высев штриховым методом на чашку с агаром МакКонки.
4. Инкубируйте чашку в течение 20 ч при 35 °C.
5. После окрашивания по Граму проведите биохимическое подтверждение культуры.
6. Инокулируйте культуры в скошенную часть пробирок с модифицированным ацетатным дифференциальным агаром.
7. Инкубируйте посевы в течение ночи при 35 °C.
8. Интерпретируйте результат по окраске среды: использование ацетата сопровождается образованием синей окраски и указывает на положительную реакцию, характерную для Escherichia coli; Shigella не образует синей окраски, поэтому среда остаётся зелёной.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный, свободно текучий порошок кремового или светло-зелёного цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 2,0%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в пробирках в виде скошенной поверхности образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель изумрудно-зелёного цвета.
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 2,92 % масс./об. при 25 °C; pH 6,70 ± 0,2.
• pH: 6,50–6,90.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 25–30 °C в течение 1–7 суток.

* Соответствующие номера WDCM.

Ограничения метода

Некоторые штаммы Escherichia coli медленно используют ацетат или не используют его вообще, поэтому могут давать ложноотрицательную реакцию.

Условия хранения и срок годности

Храните сухой продукт при температуре 10–30 °C в плотно закрытой ёмкости. Приготовленную среду храните при температуре 20–30 °C.

Используйте продукт до даты истечения срока годности, указанной на этикетке. После вскрытия плотно закрывайте флакон и храните продукт в сухом