HiMedia M331-100G Основа агара Вильсона-Блэра

Микробиологическая питательная среда HiMedia M331-100G Основа агара Вильсона-Блэра — порошковая основа массой 100 г для приготовления селективной среды с конечным pH 7,3 ± 0,2. Основа применяется с селективным реагентом для выделения Salmonella Typhi из клинических, пищевых, молочных и водных образцов; приготовленную среду хранят при 20–30 °C, а сухой продукт — при 10–30 °C.

Назначение

Основа агара Вильсона—Блэра с добавлением рекомендованного селективного реагента предназначена для выделения Salmonella Typhi. Среда особенно подходит для выделения Salmonella из клинических образцов, а также для анализа пищевых, молочных и водных проб.

Основа также пригодна для выделения лактозоферментирующих штаммов Salmonella, которые невозможно дифференцировать на дифференциальных средах, содержащих лактозу, поскольку лактоза не используется в этой среде как ферментируемый субстрат.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности. Состав эквивалентен мясному экстракту.

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 60,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В стерильную расплавленную основу добавьте 4 мл 1%-ного раствора бриллиантового зелёного и 70 мл селективного реагента.
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Приготовление растворов селективного реагента

Растворы готовят отдельно:

• Раствор 1: 40 г сульфита натрия в 100 мл дистиллированной воды.
• Раствор 2: 21 г двуосновного фосфата натрия — гидрофосфата натрия — в 100 мл дистиллированной воды.
• Раствор 3: 12,5 г цитрата висмута-аммония в 100 мл дистиллированной воды.
• Раствор 4: 0,96 г сульфата железа в 20 мл дистиллированной воды с добавлением 2 капель соляной кислоты.

После приготовления растворов объединённый раствор кипятят до появления серо-синего цвета.

Принцип действия и интерпретация

Salmonella — род грамотрицательных бактерий семейства Enterobacteriaceae, часто связанных с пищевыми инфекциями и являющихся возбудителями брюшного тифа и паратифов. Виды Salmonella выделяют от людей и животных. Известно более 2000 сероваров Salmonella, каждый из которых характеризуется определённой специфичностью к хозяину.

Люди являются единственным известным природным резервуаром серовара Salmonella Typhi и сероваров Salmonella Paratyphi A, B и C. Микроорганизмы могут передаваться фекально-оральным путём, выделяться с фекалиями человека и распространяться через загрязнённую воду, пищу или при контакте человека с человеком при несоблюдении правил личной гигиены.

Агар Вильсона—Блэра, разработанный Wilson и Blair, предназначен для выделения видов Salmonella, особенно Salmonella Typhi, из клинических образцов. Состав селективного реагента представляет собой модификацию бисульфит-висмутового реагента, описанного Hajna и Perry.

Среда обладает селективностью в отношении Salmonella и подавляет рост колиформных бактерий, Proteus и Shigella. Отдельные штаммы колиформных бактерий могут давать тусклые зелёные или коричневые колонии, но без окружающего металлического блеска.

Механизм действия компонентов:

• специальный пептон и пептон HM B обеспечивают азотистые и углеродистые соединения, а также другие питательные вещества, необходимые для роста;
• бриллиантовый зелёный подавляет все грамположительные бактерии;
• декстроза является ферментируемым углеводом;
• сульфат железа способствует образованию H₂S;
• висмут — тяжёлый металл, подавляющий большинство грамотрицательных кишечных бацилл, за исключением Salmonella;
• в присутствии сульфита висмута и декстрозы виды Salmonella восстанавливают сульфат железа с образованием сульфида железа, что проявляется формированием чёрных колоний;
• двуосновный фосфат натрия обеспечивает буферные свойства среды;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие.

Типы образцов

• Клинические образцы — фекалии.
• Пищевые и молочные образцы.
• Образцы воды.

Сбор и обращение с образцами

• Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным руководствам.
• Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно руководствам.
• Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно руководствам и местным нормативным требованиям.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Среда предназначена для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Правила безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

Не храните приготовленную среду в холодильнике при 4 °C более 2 суток: среда меняет цвет на зелёный, а её селективность снижается.

Контроль качества

Внешний вид

Кремовый или жёлтый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 3,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: светло-жёлтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• После добавления селективного реагента и 1%-ного бриллиантового зелёного: в чашках Петри образуется зеленовато-жёлтый непрозрачный гель.

Реакция

Реакция 6,0%-ного водного раствора по массе/объёму при 25 °C.

pH: 7,10–7,50.

Контрольное значение pH: 7,3 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления 1%-ного бриллиантового зелёного и селективных реагентов, после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.