Питательная среда HiMedia M317-100G EMB агар представляет собой порошкообразный агар для выделения и дифференциации грамотрицательных кишечных бактерий. Среда применяется для клинических и не клинических образцов, при этом некоторые штаммы Salmonella и Shigella могут не расти в присутствии эозина и метиленового синего, поэтому изоляты требуют подтверждающих тестов.

Назначение

Среда предназначена для выделения и дифференциации грамотрицательных кишечных бактерий из клинических и не клинических образцов.

Тип образца:

• клинические образцы — фекальные образцы;
• пищевые образцы;
• образцы воды.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Конечное значение pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация результатов

Агар с эозином и метиленовым синим (EMB-агар) первоначально разработан Holt-Harris и Teague, а затем модифицирован Levine. Используемая среда объединяет формулы Levine и Holt-Harris–Teague: пептон и фосфат введены согласно формуле Levine, два углевода — согласно формуле Holt-Harris и Teague.

Метиленовый синий и эозин Y в ограниченной степени подавляют рост грамположительных бактерий. Оба красителя выполняют функцию дифференциальных индикаторов при ферментации углеводов. Соотношение эозина и метиленового синего составляет приблизительно 6:1.

Сахароза добавлена как альтернативный источник углеводов для типичных лактозоферментирующих грамотрицательных бацилл, которые иногда не ферментируют лактозу или ферментируют её медленно.

Колиморфные бактерии при снижении pH поглощают комплекс метиленового синего и эозина, в результате чего образуют пурпурно-чёрные колонии. Комплекс красителей абсорбируется колонией. Неферментирующие микроорганизмы, вероятно, повышают pH окружающей среды за счёт окислительного дезаминирования белка; это повышает растворимость комплекса метиленового синего и эозина и приводит к образованию бесцветных колоний.

Некоторые штаммы Salmonella и виды Shigella не растут в присутствии эозина и метиленового синего. Для подтверждения выделенных изолятов требуются дополнительные тесты.

Функции компонентов:

• пептон служит источником углерода, азота и других необходимых для роста питательных веществ;
• лактоза и сахароза являются источниками энергии как ферментируемые углеводы;
• эозин Y и метиленовый синий служат дифференциальными индикаторами;
• фосфат выполняет буферную функцию.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 35,96 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Перемешайте до получения однородной суспензии.
3. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C в течение 15 мин и давлении 15 фунтов, что соответствует приблизительно 0,103 МПа.
5. Не допускайте перегрева.
6. Охладите среду до 45–50 °C.
7. Встряхните среду для окисления метиленового синего, то есть для восстановления его синего цвета, и ресуспендирования хлопьевидного осадка.

Если посев на EMB-агар выполняется в тот же день, среду допускается использовать без автоклавирования.

Посев и инкубация

Исследуемый образец можно непосредственно штрихом наносить на чашки с подготовленной средой. Инокулированные чашки следует инкубировать в защищённом от света месте.

Для получения изолированных колоний необходимо соблюдать стандартные процедуры посева. Одновременно с EMB-агаром следует инокулировать неселективную среду. Для идентификации изолированных колоний необходимо дополнительно выполнять подтверждающие тесты.

Сбор и обращение с образцами

• Для клинических образцов используйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.
• Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно руководствам.
• Для образцов воды используйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно руководствам и местным нормативам.
• После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид порошка: светло-розовый или пурпурный, однородный, сыпучий порошок.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,35%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность подготовленной среды: красновато-пурпурный опалесцирующий гель с зеленоватым оттенком и мелкодисперсным осадком, образующийся в чашках Петри.

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 3,6 % мас./об. при 25 °C; pH 7,2 ± 0,2.

Диапазон pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

• Соответствующие номера WDCM.

Ранее организм был известен как Enterobacter aerogenes.

Технические характеристики

• Назначение изделия: агар;
• Форма выпуска: порошок;
• Происхождение: животного происхождения;
• Тип продукта: стандартный;
• Тип упаковки: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности);
• Масса: 100 г;
• Температура хранения: 10–30 °C;
• Температура хранения подготовленной среды: 20–30 °C;
• Конечное значение pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2;
• Диапазон pH: 7,00–7,40.

Хранение и срок годности

Храните порошок при температуре 10–30 °C в плотно закрытой ёмкости. Подготовленную среду храните при температуре 20–30 °C.

Используйте продукт до даты истечения срока годности, указанной на этикетке. После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом состоянии для предотвращения образования комков вследствие гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к комкованию.

Храните продукт в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После использования плотно закрывайте ёмкость. Рабочие характеристики продукта сохраняются оптимально при использовании в пределах указанного срока годности.

Подготовленные и инокулированные среды следует защищать