Основа агара МакКонки с сорбитолом HiMedia M298I-500G (уп/500 гр)

Порошковая питательная среда «Основа агара МакКонки с сорбитолом HiMedia M298I-500G (уп/500 гр)» предназначена для селективного выделения и обнаружения микроорганизмов. Основа используется для выявления Escherichia coli O157:H7 в пищевых продуктах, кормах для животных и клинических образцах, при этом результаты требуют подтверждения последующим пересевом и биохимической идентификацией.

Назначение и область применения

Основа агара МакКонки с сорбитолом предназначена для селективного выделения и обнаружения энтерогеморрагических Escherichia coli O157:H7 из:

• пищевых продуктов;
• кормов для животных;
• клинических образцов.

Тип питательной среды: диагностическая.
Назначение изделия: основа питательной среды.
Форма выпуска: порошок.
Сертификат: ФСЗ 2009/03709.
Происхождение: животное.
Тип продукта: стандартный.
Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE).

Состав и критерии эффективности соответствуют ISO 16654:2001 с поправкой Amd 2:2023. Подготовка, производство, хранение и оценка рабочих характеристик культуральных сред выполняются с учётом ISO 11133:2014 с поправкой Amd 2:2020.

Принцип действия и интерпретация

В основе агара МакКонки с сорбитолом лактоза заменена сорбитолом. Среда предназначена для выделения энтеропатогенных Escherichia coli O157:H7, которые ферментируют лактозу, но медленно ферментируют сорбитол или не ферментируют его, поэтому формируют бесцветные или прозрачные колонии.

На стандартном агаре МакКонки с лактозой Escherichia coli O157:H7 неотличима от других лактозоферментирующих штаммов E. coli. На агаре МакКонки с сорбитолом большинство представителей кишечной флоры ферментируют сорбитол и образуют розовые колонии, тогда как E. coli O157:H7 формирует прозрачные колонии с бледным желтовато-коричневым оттенком. Это позволяет предварительно распознавать E. coli O157:H7 при выделении из исследуемого материала.

Среда представляет собой модификацию агара МакКонки с сорбитолом, разработанного Rappaport и Henigh, и рекомендована комитетом ISO.

Функции компонентов среды:

• триптон и пептон HM обеспечивают микроорганизмы азотистыми и углеродистыми соединениями, минеральными веществами, витаминами и микроэлементами;
• кристаллический фиолетовый и смесь солей желчных кислот подавляют рост грамположительных бактерий;
• цефиксим и теллурит калия, добавляемые в составе селективной добавки FD147, значительно уменьшают количество сорбитолонеферментирующих микроорганизмов, которые необходимо исследовать при выделении Escherichia coli O157:H7;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• нейтральный красный является индикатором;
• D-сорбитол является ферментируемым углеводом.

Агар МакКонки с сорбитолом не следует использовать как единственный метод обнаружения патогенных штаммов Escherichia coli O157:H7, поскольку некоторые нетоксигенные штаммы также не ферментируют сорбитол. E. coli O157:H7 является патогеном человека, связанным с геморрагическим колитом, вызываемым действием шигаподобного токсина (SLT).

Состав

Состав на 1 л среды:

Конечный pH при 25 °C: 7,1 ± 0,2.

Триптон эквивалентен ферментативному гидролизату казеина. Пептон HM эквивалентен ферментативному гидролизату тканей животных. Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Селективная добавка после стерилизации

Селективная добавка TC Selective Supplement (FD147): 2 флакона. Содержание в одном флаконе: теллурит калия — 1,250 мг, цефиксим — 0,025 мг.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 50,03 г порошка в 990 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды. Не допускайте перегрева.
3. Стерилизуйте автоклавированием при 121 °C в течение 15 мин; давление 15 фунтов, ориентировочно ≈0,103 МПа.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое двух флаконов селективной добавки TC Selective Supplement (FD147).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Пробоподготовка и проведение анализа

Обогащение образца

Тестовую порцию гомогенизируют и обогащают в основе модифицированного соево-желчного бульона (M1286I):

• температура инкубации: 41,5 ± 1 °C;
• первый период инкубации: 6 ч;
• дополнительный период инкубации: 12–18 ч.

Выделение микроорганизмов

1. Перенесите обогащённый материал на агар МакКонки с сорбитолом (M298I).
2. Инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 21 ± 3 ч.
3. Подтвердите принадлежность колоний биохимической характеристикой.

Тип образца

Тип исследуемого образца: пищевые продукты.

Технические характеристики

• Наименование: основа агара МакКонки с сорбитолом.
• Артикул: M298I-500G.
• Производитель: HiMedia.
• Тип питательной среды: диагностическая.
• Назначение: основа для приготовления селективной культуральной среды.
• Форма: порошок.
• Масса упаковки: 500 г.
• Материал упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE).
• Конечный pH при 25 °C: 7,1 ± 0,2.
• Диапазон pH по контролю качества: 6,90–7,30.
• Стерилизация приготовленной среды: автоклавирование при 121 °C в течение 15 мин.
• Селективная добавка: TC Selective Supplement (FD147), 2 флакона.
• Сертификат: ФСЗ 2009/03709.

Контроль качества

Внешний вид и физические свойства

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с гелем из 1,35 % агара.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный или слегка опалесцирующий гель пурпурно-красного цвета в чашках Петри.
• Реакция: реакция 5 % масс./об. водного раствора при 25 °C.
• pH: 6,90–7,30.
• Номинальный pH: 7,1 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики для оценки продуктивности и селективности определяют после добавления селективной добавки TC Selective Supplement (FD147) и инкубации при 36–38 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ограничения метода

Для подтверждения результатов необходимо выполнить последующий пересев колоний.

Наличие прозрачных или неферментирующих сорбитол колоний не является достаточным основанием для окончательной идентификации патогенного Escherichia coli O157:H7: требуется подтверждение биохимическими методами.

Условия хранения и срок годности