Основа бульона с бромкрезоловым пурпурным для листерий HiMedia M284D-500G (уп/500 гр)

Питательная среда Основа бульона с бромкрезоловым пурпурным для листерий HiMedia M284D-500G (уп/500 гр) производства HiMedia — порошковая основа с конечным pH 6,8 ± 0,2. Применяется для изучения ферментации углеводов, включая идентификацию Listeria monocytogenes и энтеробактерий, с оценкой образования кислоты и газа.

Назначение

Purple Broth Base рекомендуется для исследований ферментации углеводов у Listeria monocytogenes. Среда также применяется для изучения реакций ферментации углеводов, особенно при идентификации грамотрицательных кишечных бактерий после добавления исследуемого углевода.

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация результатов

Основа бульона с бромкрезоловым пурпурным используется для изучения реакций ферментации углеводов. Ферментация добавленного углевода сопровождается образованием кислоты, из-за чего индикатор pH бромкрезоловый пурпурный изменяет окраску на жёлтую.

Мясной экстракт и специальный пептон или пептон протеозный обеспечивают растущие микроорганизмы необходимыми питательными веществами, особенно источниками азота. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс среды. Бромкрезоловый пурпурный служит индикатором pH и приобретает жёлтую окраску в кислой среде.

Образование газа определяется по его накоплению в трубке Дюрхема. Если углевод не утилизируется и не ферментируется, цвет среды остаётся неизменным либо становится более щелочным — приобретает более тёмную пурпурную окраску — вследствие декарбоксилирования аминокислот, присутствующих в среде.

M284D отличается от Purple Broth Base M284 добавлением мясного экстракта.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 16,02 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. При необходимости добавьте 5–10 г исследуемого углевода.
3. При необходимости нагрейте среду до полного растворения.
4. Разлейте среду в пробирки, содержащие перевёрнутые трубки Дюрхема.
5. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
6. Альтернативный способ приготовления: к 900 мл стерильной охлаждённой базовой среды асептически добавьте 100 мл стерильного раствора с концентрацией 5–10 %. Конечная концентрация добавленного углевода должна составлять 0,5–1 %.

Для предотвращения возможных реакций реверсии рекомендуется добавлять углевод в концентрации 1 %, за исключением глюкозы (декстрозы). Если среда с углеводом стерилизуется автоклавированием, следует использовать минимально необходимое тепловое воздействие, чтобы избежать гидролиза углевода.

Методика проведения анализа

1. Засейте бульон чистой культурой возрастом 18–24 ч.
2. Инкубируйте при температуре 35 ± 2 °C в течение 24–72 ч. При необходимости инкубацию можно продолжать до 30 суток.
3. Выбирайте аэробную или анаэробную атмосферу в зависимости от исследуемого организма.
4. Оцените ферментацию углевода по изменению цвета среды и образованию газа в трубке Дюрхема:
   • жёлтая окраска указывает на образование кислоты при ферментации;
   • скопление газа в трубке Дюрхема указывает на газообразование;
   • неизменившаяся или более тёмная пурпурная окраска указывает на отсутствие утилизации или ферментации углевода либо на смещение реакции в щелочную область.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или светло-зелёный однородный сыпучий порошок.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Прозрачный раствор пурпурного цвета в пробирках.

Реакция среды

Реакция водного раствора с концентрацией 1,6 % масс./об. при 25 °C: pH 6,8 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,60–7,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч с добавлением 1 % декстрозы и без добавления углевода.

Технические характеристики

Условия хранения и срок годности

• Сухую среду хранить при температуре ниже 30 °C в плотно закрытой упаковке.
• Приготовленную среду хранить при температуре 2–8 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Документы и соответствие

• Сертификат: ФСЗ 2009/03705.
• ГОСТ Р 51921-2002.