Основа агара для выявления фенилкетонурии HiMedia M282-500G (уп/500 гр)

Диагностическая питательная среда Основа агара для выявления фенилкетонурии HiMedia M282-500G (уп/500 гр) — химически определённая агаровая основа в порошке. Применяется для оценки содержания фенилаланина в крови при выявлении фенилкетонурии; тип образца — кровь или моча.

Назначение

Основа агара HiMedia M282-500G предназначена для оценки содержания фенилаланина в крови при выявлении фенилкетонурии (ФКУ). Среда используется для анализа клинических образцов крови и мочи.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Тип питательной среды: диагностическая
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Происхождение: химически определённая среда
• Тип продукта: стандартный
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: ПЭВП (HDPE)
• Сертификат: ФСЗ 2009/03707
• Фасовка: 500 г

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2

Приготовление среды

1. Суспендируйте 50,06 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Не автоклавируйте и не перегревайте среду.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Добавьте споры Bacillus subtilis и 3,3 мг β-2-тиенилаланина.
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип измерения и интерпретация

Фенилкетонурия представляет собой врождённый дефект, обусловленный отсутствием фенилаланингидроксилазы. В результате фенилаланин накапливается в крови и выводится с мочой, что обусловило название заболевания. Последствием дефицита может стать повреждение головного мозга и умственная отсталость.

Guthrie и Tiekelmann разработали модифицированный ингибиторный анализ для раннего выявления фенилкетонурии у новорождённых с использованием образцов крови или мочи. Метод основан на определении уровня фенилаланина в сыворотке или уровня фенилпировиноградной кислоты в моче.

Основа агара для выявления фенилкетонурии, разработанная Demain, представляет собой химически определённую среду, дополненную β-2-тиенилаланином. Среда формирует агаровый слой для исследования образцов крови.

Тест Guthrie основан на наблюдении, что Bacillus subtilis обычно подавляется в присутствии β-2-тиенилаланина, но хорошо растёт при добавлении L-фенилаланина в среду. Фенилаланин нейтрализует β-2-тиенилаланин и обеспечивает рост бактерий. Уровень фенилаланина определяют по зоне роста, чтобы оценить содержание аминокислоты в крови. Помимо фенилаланина, могут использоваться пролин, фенилпировиноградная кислота или фенилмолочная кислота.

Тип образца

• Клинические образцы: кровь, моча

Сбор и подготовка образцов

На среду для теста на фенилкетонурию с β-2-тиенилаланином, предварительно инокулированную Bacillus subtilis, помещают небольшие диски фильтровальной бумаги, пропитанные кровью пациента.

На ту же среду помещают контрольные диски, пропитанные различными уровнями L-фенилаланина: 2, 4, 6, 8, 10, 12 и 20 мг%.

После инкубации в течение ночи наблюдают зоны роста вокруг дисков с образцами и сравнивают их с зонами вокруг контрольных дисков. Реакцию, сопоставимую с контрольным диском 4 мг%, считают предположительно положительной.

Результаты можно повторить с использованием дублирующего диска образца, а также химическим или спектрофлуориметрическим методом.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: светло-жёлтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель в чашках Петри
• Реакция: реакция 5%-ного водного раствора при 25 °C; pH 7,0 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,80–7,20

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления β-2-тиенилаланина и инкубации при 35–37 °C в течение 12–16 ч.

Примечания:

• • — соответствующие номера WDCM.
• ** Bacillus spizizenii ранее обозначался как Bacillus subtilis subsp. spizizenii.

Ограничения применения

Ограничения применения: не указаны.

Рабочие характеристики

Рабочие характеристики среды ожидаются при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения продукта: 10–30 °C
• Условия хранения продукта: в плотно закрытом контейнере
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C
• Срок использования: до даты окончания срока год