Основа бульона для микоплазм без кристаллвиолета HiMedia M267-500G (уп/500 гр)

Питательная среда «Основа бульона для микоплазм без кристаллвиолета HiMedia M267-500G (уп/500 гр)» — порошкообразная основа бульона PPLO без кристаллвиолета с конечным pH 7,8 ± 0,2. Среда предназначена для выделения и культивирования видов Mycoplasma из клинических образцов, включая назофарингеальные и орофарингеальные мазки, с обогащением лошадиной сывороткой и селективной добавкой FD075.

Назначение

Основа бульона для микоплазм без кристаллвиолета применяется для выделения и культивирования видов Mycoplasma — микроорганизмов, подобных возбудителю плевропневмонии (PPLO).

Тип питательной среды: элективный.
Назначение изделия: основа.
Сертификат: ФСЗ 2009/03709.
Форма выпуска: порошок.
Масса упаковки: 500 г.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Настой HM B эквивалентен настою говядины из исходного сырья, указанного в рецептуре производителя.

Конечный pH при 25 °C: 7,8 ± 0,2.

Принцип и интерпретация

Бульон PPLO без кристаллвиолета приготовлен по формуле Morton и Lecce. Кристаллвиолет исключён из состава из-за его ингибирующего действия на некоторые виды Mycoplasma.

Для культивирования Mycoplasma компоненты среды и все добавки не должны содержать токсичных веществ даже в небольших количествах. Для хорошего роста многим видам Mycoplasma требуется сыворотка; для предотвращения роста контаминирующих микроорганизмов также необходимо присутствие антибиотика.

Большинство видов Mycoplasma являются аэробными или факультативно-анаэробными, однако некоторые виды относятся к микроаэрофильным. Отдельные анаэробные сапрофитные виды Mycoplasma лучше растут при 22–35 °C, тогда как патогенные штаммы растут при 35 °C.

Инкубацию проводят в атмосфере, содержащей 5–10 % CO₂. Посевы исследуют после 48 ч инкубации, однако отрицательными их не следует считать и утилизировать до завершения инкубации в течение 3 недель.

После пересевания на чашки с агаром PPLO в положительных бульонных культурах могут формироваться колонии с типичной морфологией — видом «жареного яйца».

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 21,0 г порошка в 700 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте среду в автоклаве при температуре 121 °C в течение 15 мин и давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует примерно 0,103 МПа или 1,03 бар.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 300 мл лошадиной сыворотки RM1239.
6. Если в качестве селективного агента используется кристаллвиолет, добавляйте асцитическую жидкость вместо лошадиной сыворотки RM1239.
7. При необходимости добавьте 10 флаконов обогащающей добавки HPYT FD075 вместо лошадиной сыворотки.
8. Тщательно перемешайте среду.
9. В асептических условиях разлейте среду в стерильные пробирки.

Образцы

Тип образца: клинические образцы — назофарингеальные и орофарингеальные мазки.

При работе с клиническими образцами необходимо применять соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с утверждёнными лабораторными руководствами.

После использования контаминированные материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Условия культивирования

Инкубацию проводят в атмосфере с содержанием 5–10 % CO₂. Большинство видов Mycoplasma являются аэробными или факультативно-анаэробными, некоторые — микроаэрофильными.

Условия роста:

• анаэробные сапрофитные виды Mycoplasma: 22–35 °C;
• патогенные штаммы: 35 °C;
• продолжительность первичного наблюдения: не менее 48 ч;
• срок, до которого нельзя считать культуру отрицательной: 3 недели.

Для оптимального выделения микроорганизмов необходимо учитывать их требования к содержанию кислорода и поддерживать соответствующие условия инкубации. Высокообогащённая среда требует особой осторожности при приготовлении и инокуляции для предотвращения контаминации.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид порошка: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Приготовленная среда: прозрачный раствор жёлтого цвета в пробирках.

Реакция и pH

Реакция: реакция 2,1 % масс./об. водного раствора при 25 °C.

pH раствора: 7,8 ± 0,2.
Диапазон pH: 7,60–8,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в присутствии 10 % CO₂, 1 % лошадиной сыворотки RM1239 и обогащающей добавки HPYT FD075 после инкубации при 22–35 °C в течение 48 ч.

Технические характеристики

Хранение и срок годности

Хранение сухого продукта: при температуре 10–30 °C в плотно закрытой упаковке.

Хранение приготовленной среды: при 2–8 °C.

Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом состоянии. Порошок обладает гигроскопичностью; попадание влаги может привести к образованию комков. Продукт следует хранить в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После каждого использования контейнер необходимо плотно закрывать.

Ограничения применения

1. Виды Mycoplasma имеют разные требования к содержанию кислорода: большинство являются аэробными или факультативно-анаэробными, некоторые — микроаэрофильными. Для оптимального выделения необходимо проводить инкубацию в соответствующих условиях.
2. Анаэробные сапрофитные виды Mycoplasma лучше растут при 22–35 °C, а патогенные штаммы — при 35 °C; заданные температурные условия должны поддерживаться в течение инкубации.
3. Из-за высокой степени обогащения среды при приготовлении и инокуляции необходимо предотвращать контаминацию.
4. Результ