Основа агара для микоплазм HiMedia M266-500G (уп/500 гр)

Основа агара для микоплазм HiMedia M266-500G (уп/500 гр) — сухая питательная среда для микробиологических исследований, предназначенная для приготовления агара PPLO с конечным pH 7,8 ± 0,2. Основа применяется с обогащающими добавками для выделения и культивирования видов Mycoplasma из клинических и фармацевтических образцов, при этом требуется инкубация в атмосфере с 5–10 % CO₂ и выдержка посевов до 3 недель для исключения ложноотрицательного результата.

Назначение

Основа агара для микоплазм с добавлением обогащающих компонентов предназначена для выделения и культивирования видов Mycoplasma — плевропневмониеподобных организмов (PPLO).

Тип питательной среды: элективный.
Назначение изделия: основа.
Сертификат: ФСЗ 2009/03709.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих характеристик. HM-инфузия B эквивалентна настою из говяжьего сердца.

Конечный pH при 25 °C: 7,8 ± 0,2.

Технические характеристики

Масса упаковки: 500 г.

Принцип действия и интерпретация

Для культивирования Mycoplasma все компоненты среды и обогащающие добавки не должны содержать токсичных веществ даже в малых количествах.

• HM-инфузия B и пептон обеспечивают источники азота и углерода, длинноцепочечные аминокислоты, витамины и другие необходимые питательные вещества.
• Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс среды.
• Для полноценного роста многих видов Mycoplasma необходима сыворотка.
• Для предотвращения роста контаминирующих микроорганизмов необходимо присутствие антибиотика.
• Большинство видов Mycoplasma являются аэробными или факультативно-анаэробными; некоторые виды относятся к микроаэрофильным.
• Отдельные анаэробные сапрофитные виды Mycoplasma лучше всего растут при 22–35 °C, тогда как патогенные штаммы растут при 35 °C.
• При росте на агаризованной среде Mycoplasma формируют характерную морфологию: колонии располагаются ниже поверхности агара и не развиваются без сыворотки.

Колонии PPLO на агаре имеют круглую форму, плотный центр и менее плотную периферическую зону, напоминающую «глазунью». На периферии видны вакуоли — крупные образования, характерные для видов Mycoplasma. Диаметр колоний составляет 10–500 мкм (0,01–0,5 мм); колонии проникают в толщу среды.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 36,0 г порошка в 700 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (ориентировочно ≈0,103 МПа) при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 300 мл лошадиной сыворотки RM1239 или 10 флаконов обогащающей добавки HPYT FD075.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Вместо лошадиной сыворотки допускается использовать 25 % асцитической жидкости.

Условия культивирования

Чашки или пробирки инкубируют в атмосфере, содержащей 5–10 % CO₂. Первичный осмотр проводят после 48 ч инкубации, однако посевы не следует считать отрицательными и утилизировать ранее чем через 3 недели инкубации.

Культуральные характеристики определяют в присутствии 10 % CO₂ с добавлением 1 % лошадиной сыворотки RM1239 или 10 флаконов обогащающей добавки HPYT FD075 после инкубации при 22–35 °C в течение 48 ч.

Образцы

Типы образцов:

• клинические образцы мочи;
• мазки из уретры;
• образцы мокроты;
• фармацевтические образцы.

Сбор и обращение с образцами

Для фармацевтических образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно фармацевтическим требованиям.

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным лабораторным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Виды Mycoplasma могут быть аэробными, факультативно-анаэробными или микроаэрофильными, поэтому для оптимального выделения необходимо обеспечить соответствующие условия инкубации.
2. Отдельные анаэробные сапрофитные виды Mycoplasma лучше всего растут при 22–35 °C, а патогенные штаммы — при 35 °C; температурный режим должен поддерживаться в соответствии с исследуемым организмом.
3. Среда имеет высокую степень обогащения, поэтому при инокуляции необходимо соблюдать меры, предотвращающие контаминацию.

Контроль качества

Внешний вид: однородный, свободно текучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель жёлтого цвета.

Реакция: реакция 3,6 % водного раствора, вес/объём, при 25 °C.

pH: 7,60–8,00.

Условия хранения и срок годности

• Хранение порошка: в плотно закрытой ёмкости при температуре ниже 10–30 °C.
• Хранение приготовленной среды: при 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования ёмкость следует плотно закрывать.