HiMedia M266-100G Основа PPLO агара

Основа питательной среды HiMedia M266-100G Основа PPLO агара производства HiMedia — порошкообразный компонент для приготовления среды с конечным pH 7,8 ± 0,2. Применяется с обогащением для выделения и культивирования видов Mycoplasma; масса упаковки составляет 100 г, температура хранения — 10–30 °C.

Назначение

Основа PPLO-агара предназначена для приготовления обогащённой питательной среды, используемой для выделения и культивирования видов Mycoplasma — плевропневмониеподобных организмов (PPLO).

Тип образца:

• клинические образцы: моча, мазок из уретры, мокрота;
• фармацевтические образцы.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик. Эквивалент: настой из говяжьего сердца.

Конечный pH при 25 °C: 7,8 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация

PPLO-агар предназначен для культивирования Mycoplasma. Компоненты среды и все добавляемые обогатители должны быть свободны даже от небольших количеств токсичных веществ.

Настой HM B и пептон обеспечивают источник азота и углерода, аминокислоты с длинной цепью, витамины и другие необходимые питательные вещества. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс среды.

Для хорошего роста многих видов Mycoplasma требуется сыворотка; для предотвращения роста посторонних микроорганизмов также необходимо присутствие антибиотика. Большинство видов Mycoplasma являются аэробными или факультативно-анаэробными, некоторые — микроаэрофильными. Отдельные анаэробные сапрофитные виды Mycoplasma лучше растут при 22–35 °C, тогда как патогенные штаммы растут при 35 °C.

При росте на агаризованной среде Mycoplasma образуют характерные колонии, в том числе расположенные ниже поверхности агара; без сыворотки рост не происходит.

Чашки или пробирки следует инкубировать в атмосфере, содержащей 5–10 % углекислого газа, и исследовать через 48 ч инкубации. Не следует считать посев отрицательным и утилизировать его ранее чем через 3 недели инкубации.

Колонии PPLO на PPLO-агаре имеют округлую форму с плотным центром и менее плотной периферией, напоминающей «яичницу-глазунью». На периферии видны вакуоли — крупные образования, характерные для видов Mycoplasma. Диаметр колоний составляет от 10 до 500 мкм (0,01–0,5 мм); колонии проникают в толщу среды.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 36,0 г порошка в 700 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа, ≈1,03 бар) при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 300 мл лошадиной сыворотки (RM1239) или 10 флаконов обогатительной добавки HPYT (FD075).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Вместо лошадиной сыворотки можно использовать 25 % асцитической жидкости.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдают при наличии 10 % углекислого газа, с добавлением 1 % лошадиной сыворотки (RM1239) или 10 флаконов обогатительной добавки HPYT (FD075), после инкубации при 22–35 °C в течение 48 ч.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель жёлтого цвета.
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 3,6 % масса/объём при 25 °C; pH 7,8 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,60–8,00.

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Пробоотбор и обращение с образцами

Для фармацевтических образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно фармацевтическим руководствам.

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно утверждённым руководствам. После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Виды Mycoplasma могут быть аэробными, факультативно-анаэробными или микроаэрофильными, поэтому для оптимального выделения необходимо обеспечить соответствующие условия инкубации.
2. Некоторые анаэробные сапрофитные виды Mycoplasma лучше растут при 22–35 °C, а патогенные штаммы — при 35 °C; условия культивирования необходимо поддерживать в соответствии с исследуемым микроорганизмом.
3. Из-за высокой обогащённости среды при посеве необходимо соблюдать особую осторожность, чтобы избежать загрязнения.

Предупреждения и меры предосторожности

• Среда предназначена для диагностики вне организма и только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно утверждённым руководствам.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Хранение и срок годности

• Условия хранения сухого препарата: при 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Используйте препарат до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия храните препарат в сухом виде, плотно закрывая флакон, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните препарат в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывайте контейнер.
• Рабочие характеристики сохраняются при использовании в течение установленного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте утверждённые лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Технические характеристики

| Параметр | Значение | | --- |