HiMedia M239-100G Основа среды для лептоспир, Флетчер

Основа питательной среды HiMedia M239-100G Основа среды для лептоспир, Флетчер производства HiMedia — порошкообразная среда для выделения, культивирования и поддержания видов Leptospira. Применяется для исследования крови, спинномозговой жидкости и мочи; хранится при 10–30 °C, а приготовленная среда — при 2–8 °C.

Назначение

Основа среды Флетчера рекомендована для выделения, культивирования и поддержания видов Leptospira, включая патогенный вид Leptospira interrogans. Среда используется при исследовании клинических образцов крови, спинномозговой жидкости и мочи.

Клиническая диагностика лептоспироза основана на культивировании возбудителя из крови или спинномозговой жидкости в течение первой недели заболевания либо из мочи в последующие месяцы.

Состав

Конечный pH при 25 °C: 7,9 ± 0,2.

Формула эквивалентна экстракту говядины. Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия установленным эксплуатационным параметрам.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 2,5 г порошка в 920 мл очищенной или дистиллированной воды. Объём воды должен учитывать последующее добавление обогащающей добавки.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов, ориентировочно ≈0,10 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 80 мл стерильной обогащающей добавки для лептоспир — кроличьей или лошадиной сыворотки RM1239.
6. Доведите конечный объём до 1 л.
7. Разлейте приготовленную среду в необходимую лабораторную посуду.

Принцип действия и интерпретация

Лептоспиры представлены свободноживущими и паразитическими формами. Патогенные виды относят к Leptospira interrogans. Микроорганизмы имеют настолько малый размер, что не наблюдаются в нативных препаратах из свежей крови.

В образец среды Флетчера инокулируют несколько капель крови, стабилизированной гепарином или антикоагулянтом на основе хлорида натрия. Основа среды Флетчера приготовлена по формуле Флетчера и используется для выделения Leptospira из образцов крови, мочи и ткани почек.

Все посевы инкубируют в темноте при комнатной температуре до 6 недель. Микроорганизмы растут ниже поверхности среды. Материал отбирают на несколько сантиметров ниже поверхности бульонной культуры и еженедельно исследуют на наличие роста методом прямого нативного препарата в тёмном поле. Для лептоспир характерна винтообразная подвижность.

Пептон и пептон HM B обеспечивают микроорганизмы необходимыми для роста питательными веществами. Хлорид натрия поставляет необходимые ионы. Обогащающая добавка обеспечивает источники углерода, витаминов и энергии, требуемые для роста Leptospira. Низкая концентрация агара облегчает выявление подвижности.

Основа среды для лептоспир обогащается добавлением кроличьей сыворотки. Кроличья сыворотка содержит природный гемоглобин, который вместе с тиамином поддерживает рост лептоспир.

Пробирки исследуют на наличие роста каждые 5–7 дней. Рост формируется в виде кольцевидной зоны, или диска, на расстоянии 1–3 см ниже поверхности среды. Отсутствие кольцевидной зоны не обязательно означает отсутствие лептоспир. Небольшое количество материала из зоны диска отбирают и исследуют микроскопически. Окраска по Граму для этой цели неудовлетворительна. Микроколонии можно фиксировать метанолом и окрашивать по Гимзе для выявления палочковидных форм.

Тип образцов

• Клинические образцы крови — при отборе в течение первой недели заболевания.
• Спинномозговая жидкость — при отборе в течение первой недели заболевания.
• Моча — при последующем исследовании.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяют соответствующие методы обращения с материалом в соответствии с установленными лабораторными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления стерильной обогащающей добавки для лептоспир — кроличьей или лошадиной сыворотки RM1239 — и инкубации при 30–32 °C в течение 5 суток.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, сыпучий порошок от белого до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Полужидкая среда, сопоставимая с 0,15 % гелем агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках образуется гель очень светло-жёлтого цвета, слегка опалесцирующий.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 0,25 % масс./об. при 25 °C: pH 7,9 ± 0,2.

Диапазон pH

7,70–8,10.

Технические характеристики

Условия хранения и срок годности

• Хранить при температуре 10–30 °C в плотно закрытой ёмкости.
• Приготовленную среду хранить при 2–8 °C.
• Использовать до даты истечения срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования плотно закрывать ёмкость.
• Эксплуатационные характеристики продукта сохраняются при использовании в течение установленного срока годности.

Ограничения применения

1. Последовательное культивирование образцов, отобранных с интервалом не менее 1 суток, повышает вероятность получения положительной культуры, поскольку выделение Leptospira может происходить периодически.
2. Разные микроорганизмы имеют индивидуальные требования к росту и могут демонстрировать различные варианты роста на среде.
3. Каждая серия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа. При использовании среды для конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, рекомендуется самостоятельно валидировать среду с учётом требований конкретного исследования.

Требования безопасности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитать этикетку.
• При работе использовать защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдать надлежащие правила микробиологической лабораторной работы.
• При работе с клиническими образцами соблюдать стандартные меры предосторожности.
• Руководствоваться требованиями безопасности, приведёнными в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

Материалы, являющиеся инфекционными или контактировавшие с клиническими образцами, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками и установленными процедурами обращения с инфекционными материалами.

Ожидаемые эксплуатационные характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при приготовлении и использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах установленного срока годности и при хранении в рекомендованном температурном диапазоне.