Агар Чепмена-Стоуна HiMedia M215-500G (уп/500 гр)

Диагностическая питательная агаризованная среда «Агар Чепмена-Стоуна HiMedia M215-500G (уп/500 гр)» производства HiMedia предназначена для селективного выделения стафилококков, вызывающих пищевые отравления. Агар Чепмена-Стоуна применяется для анализа образцов пищевых продуктов и дифференциального выявления стафилококков по пигментации, ферментации маннита и гидролизу желатина.

Назначение

Рекомендуемое назначение среды — селективное выделение стафилококков, вызывающих пищевые отравления, из образцов пищевых продуктов.

Среда особенно предназначена для исследований предполагаемых пищевых отравлений, связанных с Staphylococcus. Исследуемый материал наносят на поверхность среды и инкубируют для получения изолированных колоний.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация результатов

Staphylococcus aureus относится к патогенам, которые часто выделяют из клинических образцов. Лечение инфекций, вызываемых S. aureus, осложняется распространением штаммов с множественной лекарственной устойчивостью. Для более удобного и надёжного выявления S. aureus в контаминированных образцах применяют селективные питательные среды.

Агар Чепмена-Стоуна используют для выделения стафилококков, вызывающих пищевые отравления. Продукты, часто контаминированные S. aureus, включают синтетические кремы, заварные кремы и продукты с высоким содержанием соли.

Среда приготовлена на основе модификации среды для стафилококков № 110, описанной Чепменом. В отличие от ранее описанной среды для стафилококков № 110, концентрация хлорида натрия снижена до 5,5 %, а в состав дополнительно включён сульфат аммония. Основная модификация заключается во включении сульфата аммония непосредственно в состав среды, что позволяет наблюдать гидролиз желатина без добавления реагентов на поверхность чашки.

Селективность среды обусловлена относительно высоким содержанием соли. Дифференциальные свойства определяются пигментацией колоний, ферментацией маннита и наличием или отсутствием разжижения желатина.

Функции компонентов:

• Триптон и дрожжевой экстракт обеспечивают среду источниками азота, углерода, серы, витамина B и микроэлементов.
• Хлорид натрия действует как селективный агент и ингибирует большинство видов бактерий.
• Маннит является ферментируемым углеводом. Его ферментацию выявляют добавлением нескольких капель бромкрезолового пурпурного, при этом появляется жёлтая окраска.
• Гидролиз желатина выявляют по образованию прозрачных зон вокруг колоний.
• Благодаря наличию сульфата аммония в составе среды нет необходимости заливать поверхность чашки раствором сульфата аммония для выявления разжижения желатина изолятами; такой способ известен как метод Стоуна.
• Гидрофосфат дикалия обеспечивает буферную способность среды.

После инкубации кремовые или золотисто-жёлтые колонии, окружённые прозрачными зонами, предположительно идентифицируют как S. aureus. Белые или непигментированные колонии с прозрачной зоной или без неё предположительно идентифицируют как S. epidermidis. Для подтверждения результатов следует выполнить тест на коагулазную активность.

Энтерококки и/или стрептококки группы D могут расти на этой среде и демонстрировать слабую ферментацию маннита. Такие колонии имеют небольшой размер и могут быть дифференцированы от стафилококков с помощью окраски по Граму и каталозной пробы.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 20,25 г сухой среды в 100 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов (ориентировочно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 10 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Методика проведения анализа

1. Нанесите исследуемый материал на поверхность приготовленной среды.
2. Инкубируйте при 30 °C в течение 48 ч для формирования разделённых колоний.
3. Оцените внешний вид колоний, пигментацию, наличие прозрачных зон и признаки ферментации маннита.
4. Для подтверждения предполагаемой идентификации выполните тест на коагулазную активность.
5. При необходимости дифференцируйте энтерококки и стрептококки группы D от стафилококков с помощью окраски по Граму и каталозной пробы.
6. Для дальнейшей идентификации выполните дополнительные биохимические и серологические тесты.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид сухой среды: порошок от кремового до жёлтого цвета, крупнодисперсный, свободно сыпучий.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем и 3,0%-ным желатиновым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется гель светло-янтарного цвета с опалесценцией.

Реакция среды

Реакция: реакция водного раствора концентрацией 20,25 % масс./об. при 25 °C; pH 7,0 ± 0,2.

Диапазон pH

Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 25–30 °C в течение 18–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Тип образца

Тип образца: пищевые продукты.

Сбор и обращение с образцами

Для пищевых продуктов применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов в соответствии с установленными руководствами.

После использования контаминированные материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения метода

1. Энтерококки и/или стрептококки группы D могут расти на среде и демонстрировать слабую ферментацию маннита. Такие колонии имеют небольшой размер и могут быть легко дифференцированы от стафилококков с помощью окраски по Граму и каталозной пробы.
2. Для дальнейшей идентификации необходимо провести дополнительные биохимические и серологические тесты.
3. Предположительную идентификацию S. aureus и S. epidermidis необходимо подтверждать тестом на коагулазную активность.

Технические характеристики

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: