Основа кровяного агара для листерий HiMedia M2096I-50G (50 г) производства HiMedia — порошковая питательная среда с конечным pH 7,2 ± 0,2 при 25 °C. Среда предназначена для выявления гемолитических реакций видов Listeria в пищевых продуктах, кормах для животных и пробах окружающей среды; результат зависит от источника используемой крови.

Назначение и область применения

Среда рекомендована для исследования гемолитических реакций видов Listeria в пробах пищевых продуктов, кормов для животных и окружающей среды, отобранных в зонах производства и обращения пищевой продукции.

Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям ISO 11290-1:2017 и ISO 11290-2:2017. В качестве исследуемого материала используют чистые изоляты из пищевых продуктов, кормов для животных и проб окружающей среды, отобранных в зонах производства и обращения пищевой продукции.

Состав

Суспензия 42,50 г сухой среды предназначена для приготовления 1000 мл готовой основы.

Эквивалентен ферментативному гидролизату тканей животных.

Эквивалентен гидролизату печени.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Принцип действия и интерпретация

L. monocytogenes — грамположительная факультативно-анаэробная палочковидная бактерия. Микроорганизм способен расти при охлаждении, поэтому представляет значимую проблему для пищевой промышленности.

Выделение Listeria из пищевых продуктов и проб окружающей среды часто имеет низкую эффективность, поэтому перед изоляцией требуется этап обогащения. Для выявления видов Listeria, особенно L.monocytogenes, применяют селективные и дифференциальные питательные среды.

Основа кровяного агара рекомендована ISO для выделения видов Listeria из пищевых продуктов, кормов для животных и проб окружающей среды в зонах производства и обращения пищевой продукции. Добавление 5–7 % об./об. стерильной дефибринированной крови овцы позволяет выявлять гемолитический профиль.

Среда дифференцирует патогенные β-гемолитические виды Listeria, включая L.monocytogenes, L.seeligeri и L.ivanovii, от негемолитических и непатогенных видов, к которым относятся L. innocua, L. grayi и L.welshimeri.

Среда также может использоваться для постановки CAMP-теста, позволяющего дифференцировать виды между собой. CAMP-тест выполняют с использованием S. aureus и Rhodococcus equi. Другие штаммы Listeria, включая L.fleischmanii, L.marthii, L.rocourtiae и L. weihenstephanensis, демонстрируют отрицательную β-гемолитическую реакцию; отрицательная реакция также наблюдается при проведении CAMP-теста с S. aureus и R. equi.

Пептон, экстракт HML и дрожжевой экстракт обеспечивают микроорганизмы азотсодержащими и углеродсодержащими соединениями, аминокислотами с длинной цепью, витаминами и другими необходимыми питательными веществами. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс.

Методика приготовления среды

1. Взвесьте 42,50 г порошка и суспендируйте в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм², что соответствует примерно 0,10 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите основу до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 5–7 % об./об. стерильной дефибринированной крови овцы.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Пробоотбор и обращение с образцами

Для пищевых продуктов, кормов для животных и проб окружающей среды, отобранных в зонах производства и обращения пищевой продукции, применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Основная среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель жёлтого цвета.
• После добавления 5–7 % об./об. стерильной дефибринированной крови: в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.

Реакция

Реакция 4,25%-ного раствора в воде при 25 °C:

• pH: 7,2 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют при добавлении 5 % масс./об. стерильной дефибринированной крови после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч. При необходимости инкубацию продолжают до получения удовлетворительного роста.

* Соответствующие номера WDCM.

Ограничения применения

Гемолитический профиль зависит от источника используемой крови.

Ожидаемые рабочие характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при приготовлении и применении в соответствии с инструкцией на этикетке и в пределах срока годности при хранении в рекомендованных условиях.

Условия хранения и срок годности

• Сухая среда: хранить при температуре 10–30 °C в плотно закрытой ёмкости.
• Приготовленная среда: хранить при температуре 2–8 °C.
• Срок использования: до даты, указанной на этикетке.
• После вскрытия: хранить в сухом виде, плотно закрывая флакон, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности продукта.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Место хранения: сухая вентилируемая зона, защищённая от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывать ёмкость.
• Рабочие характеристики сохраняются при использовании в течение указанного срока годности.

Меры предосторожности

Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку. При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.

При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики. При работе с образцами необходимо выполнять стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами. Рекомендации по безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Пользователь обязан обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов необходимо соблюдать установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими методиками лабораторной работы.

Технические характеристики