HiMedia M2067-500G HiCrome агар Мюллера-Хинтона (для противогрибковых тестов)

Хромогенная питательная среда HiMedia M2067-500G HiCrome агар Мюллера-Хинтона (для противогрибковых тестов) предназначена для дифференциации дрожжей из клинических образцов и определения их чувствительности к антимикотикам. Среда обеспечивает рост грибов за счет добавления глюкозы и позволяет проводить идентификацию изолятов Candida непосредственно при первичном выделении.

Принцип измерения и интерпретация

Основой среды является модифицированный агар Мюллера-Хинтона, который рекомендован стандартами CLSI для диффузионного метода определения чувствительности к антимикотикам. Добавление глюкозы до конечной концентрации 2 % обеспечивает подходящие условия для роста грибов.

Хромогенные свойства среды основаны на способности Candida albicans вырабатывать фермент $\beta$-N-ацетилгалактозаминидазу. Включение в состав субстратов гексозаминидазы позволяет дифференцировать виды по цвету колоний:

• C. albicans: светло-зеленые гладкие колонии;
• C. tropicalis: синие или металлически-синие выпуклые колонии;
• C. glabrata: кремовые или белые гладкие колонии;
• C. krusei: пурпурные ворсистые колонии.

Ациказе (эквивалент кислотного гидролизата казеина) обеспечивает азот, углерод, длинноцепочечные аминокислоты и серу. Глюкоза служит основным источником энергии для грибковых культур.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Выберите пять отдельных колоний размером около 1 мм из 24-часовой культуры, выращенной на агаре Сабуро с декстрозой (M063) при 35 $\pm$ 2 °C.
2. Суспендируйте колонии в 5 мл стерильного 0,85 % раствора NaCl.
3. Перемешайте суспензию на вортексе и доведите мутность до значения $1 \times 10^6$ – $5 \times 10^6$ клеток/мл (соответствует стандарту 0,5 по МакФарланду).

Процедура тестирования

1. Подготовьте чашки с HiCrome агаром Мюллера-Хинтона. Слой среды должен быть около 4 мм.
2. С помощью стерильного нетоксичного ватного тампона на деревянном аппликаторе нанесите стандартизированный инокулят на поверхность агара. Поверхность засевают трижды, поворачивая чашку на 60° между каждым проходом.
3. Оставьте инокулят подсохнуть в течение 5–15 минут с закрытой крышкой.
4. Асептически установите диски с антимикотиками так, чтобы расстояние между центрами дисков было не менее 24 мм (не более 12 дисков на чашку 150 мм или не более 5 дисков на чашку 100 мм).
5. Переверните чашки и поместите в инкубатор при температуре 35 $\pm$ 2 °C в течение 15 минут после нанесения дисков.
6. Оцените результат через 20–24 часа инкубации. Если рост недостаточен, считывание результатов производится через 48 часов.

Технические характеристики

Состав, г/л:

• Конечный pH (при 25 °C): 7,3 $\pm$ 0,1
• Внешний вид: порошок от кремового до желтого цвета, однородный, свободно текучий
• Желирование: плотный гель (сопоставимо с 1,7 % агаром)
• Цвет и прозрачность готовой среды: желтый или янтарный опалесцирующий гель
• pH водного раствора (5,28 % масс./об. при 25 °C): 7,3 $\pm$ 0,2
• Диапазон pH: 7,10–7,50

Дополнительные параметры:

Культуральные характеристики

Рост тестовых организмов наблюдается через 24–48 часов при 33–37 °C с формированием зон торможения.

Инструкции по приготовлению

1. Суспендируйте 52,80 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте по стерильным чашкам Петри.

Область применения и ограничения

Среда предназначена только для диагностики in vitro и профессионального использования. Применяется для работы с изолированными микроорганизмами из клинических образцов.

Ограничения:

• Рекомендуется только для тестирования чистых культур.
• Плотность инокулята влияет на размер зоны торможения: избыточный инокулят может привести к уменьшению зон, недостаточный — к их увеличению.
• Требовательные организмы могут не расти на данной среде.
• Интенсивность окраски некоторых видов Candida может варьироваться в зависимости от активности ферментов.
• Результаты in vitro могут не совпадать с клинической картиной in vivo.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре 15–25 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия плотно закрывайте бутылку во избежание образования комков.
• Утилизация: использованные среды и материалы, контактировавшие с клиническими образцами, подлежат стерилизации в автоклаве или сжиганию.