HiMedia M2067-500G HiCrome агар Мюллера-Хинтона (для противогрибковых тестов)

Питательная среда HiMedia M2067-500G HiCrome агар Мюллера-Хинтона (для противогрибковых тестов) — порошкообразный агар массой 500 г для хромогенной дифференциации дрожжей. HiMedia M2067-500G применяют для определения чувствительности дрожжей к противогрибковым препаратам и идентификации микроорганизмов из клинических образцов; среда предназначена только для чистых культур.

Назначение

Среда рекомендована для:

• хромогенной дифференциации дрожжей из клинических образцов;
• определения чувствительности дрожжей к противогрибковым препаратам методом дисковой диффузии;
• идентификации изолятов Candida непосредственно при первичном выделении.

Тип образца: выделенный микроорганизм из клинического образца.

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик. Acicase эквивалентен кислотному гидролизату казеина.

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,1.

Технические характеристики

• Назначение изделия: агар
• Тип продукта: HiCrome™
• Форма выпуска: порошок
• Происхождение: животное
• Тип упаковки: ПЭВП (HDPE, полиэтилен высокой плотности)
• Масса: 500 г
• Производитель: HiMedia
• Условия хранения сухой среды: 15–25 °C
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Конечный pH: 7,3 ± 0,1
• Диапазон pH по контролю качества: 7,10–7,50

Принцип действия и интерпретация

Среда Мюллера—Хинтона первоначально разработана как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных микроорганизмов. Модифицированный агар Мюллера—Хинтона, соответствующий требованиям CLSI для противогрибковых исследований, используют для диффузии противогрибковых препаратов, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель.

Добавление глюкозы до конечной концентрации 2 % обеспечивает условия, подходящие для роста грибов. Агар Мюллера—Хинтона также применяют при определении чувствительности микроорганизмов к антибиотикам с использованием диска с высокой концентрацией препарата. Воспроизводимость результатов послужила основанием для принятия агара Мюллера—Хинтона Комитетом ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности микроорганизмов.

Для определения чувствительности к противомикробным препаратам также применяют агар Мюллера—Хинтона с 5 % бараньей кровью и агар Мюллера—Хинтона с гемоглобином для Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae. HiCrome™ агар Мюллера—Хинтона предназначен для определения чувствительности к противогрибковым дискам с одновременной хромогенной дифференциацией дрожжей.

Candida albicans продуцирует фермент β-N-ацетилгалактозаминидазу. Введение в питательную среду хромогенных или флуорогенных субстратов гексозаминидазы способствует идентификации изолятов C. albicans непосредственно при первичном выделении.

Функции компонентов:

• Acicase обеспечивает азотистые и углеродсодержащие соединения, аминокислоты с длинной цепью, серу и другие необходимые питательные вещества.
• Крахмал действует как защитный коллоид, связывающий токсичные вещества, присутствующие в среде.
• При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии.
• Глюкоза обеспечивает энергией грибковые культуры.
• Хромогенная смесь обеспечивает различия в окраске колоний.

Характерная окраска колоний:

• C. albicans — гладкие колонии светло-зелёного цвета;
• C. tropicalis — выпуклые колонии от синего до металлически-синего цвета;
• C. glabrata — гладкие колонии кремового или белого цвета;
• C. krusei — пурпурные пушистые колонии.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 52,80 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Не стерилизуйте в автоклаве.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Рабочие характеристики данной партии проверены и стандартизированы в соответствии с действующим документом CLSI M44-A2 «Метод определения чувствительности дрожжей к противогрибковым препаратам методом дисковой диффузии».

Методика проведения анализа

Подготовка инокулюма

1. Используйте культуру, выращенную на агаре Сабуро с декстрозой (M063) в течение 24 ч при 35 ± 2 °C.
2. Отберите пять отдельных колоний размером приблизительно 1 мм.
3. Суспендируйте колонии в 5 мл стерильного физиологического раствора концентрацией 0,85 %.
4. Перемешайте полученную суспензию на вихревом смесителе.
5. Отрегулируйте мутность до концентрации 1 × 10⁶–5 × 10⁶ клеток/мл, соответствующей стандарту Мак-Фарланда 0,5.

Проведение теста чувствительности

1. Подготовьте чашки с агаром HiCrome™ Мюллера—Хинтона для определения чувствительности к дискам с противогрибковыми препаратами. Среда в чашках должна быть стерильной, толщина слоя — приблизительно 4 мм.
2. Погрузите стерильный нетоксичный ватный тампон на деревянном аппликаторе в стандартизованный инокулюм. Мутность суспензии должна обеспечивать полусливающийся рост на чашке Петри.
3. Плотно прижмите пропитанный тампон к верхней внутренней стенке пробирки, чтобы удалить избыток жидкости.
4. Засейте всю поверхность агара тампоном три раза, поворачивая чашку на 60° между нанесениями.
5. Оставьте посев подсыхать на 5–15 мин с закрытой крышкой.
6. Асептически нанесите диски. Расстояние между центрами дисков должно составлять не менее 24 мм. На чашку диаметром 150 мм помещайте не более 12 дисков, на чашку диаметром 100 мм — не более 5 дисков.
7. Переверните чашки и поместите их в инкубатор, установленный на 35 ± 2 °C, не позднее чем через 15 мин после нанесения дисков.
8. Исследуйте каждую чашку через 20–24 ч инкубации.
9. При правильно выполненном посеве зоны ингибирования должны иметь равномерно круглую форму, а поверхность чашки — покрываться полусливающимся газоном роста.
10. Проводите считывание через 48 ч только при недостаточном росте после 24 ч инкубации.

Контроль качества

Внешний вид

Кремовый или жёлтый однородный легко сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,7 %-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется гель от жёлтого до янтарного цвета с опалесценцией.

Реакция

Реакция 5,28 % (масса/объём) водного раствора при 25 °C: pH 7,3 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Обильный рост тестовых микроорганизмов наблюдается на агаре HiCrome™ Мюллера—Хинтона через 24–48 ч при 33–37 °C одновременно с зонами ингибирования при использовании соответствующих концентраций противомикробных препаратов.

| Организм | Рост | Цвет колонии | Чувствительность к флуконазолу | Чувствительность к ворикона