HiMedia M2067-100G HiCrome агар Мюллера-Хинтона (для противогрибковых тестов)

Хромогенная питательная среда HiMedia M2067-100G HiCrome агар Мюллера-Хинтона (для противогрибковых тестов) с массой 100 г. Рекомендуется для хромогенной дифференциации дрожжей из клинических образцов и определения их чувствительности к противогрибковым препаратам.

Область применения

Среда используется для выделения и идентификации видов Candida из клинического материала, а также для проведения тестов на чувствительность к антимикотикам методом диффузии дисков.

Принцип измерения и интерпретация

Основой среды является модифицированный агар Мюллера-Хинтона, который обеспечивает воспроизводимый рост грибов и равномерную диффузию противогрибковых агентов. Добавление глюкозы (до конечной концентрации 2 %) создает необходимые условия для роста грибковых культур.

Хромогенные свойства среды основаны на способности Candida albicans вырабатывать фермент $\beta$-N-ацетилгалактозаминидазу. Включение в состав специфических хромогенных субстратов позволяет идентифицировать изоляты непосредственно на первичном посеве по цвету колоний:

• C. albicans: гладкие колонии светло-зелёного цвета.
• C. tropicalis: выпуклые колонии от синего до металлически-синего цвета.
• C. glabrata: гладкие колонии от кремового до белого цвета.
• C. krusei: пушистые колонии фиолетового цвета.

Ациказе (гидролизат казеина) обеспечивает азот, углерод, длинноцепочечные аминокислоты и серу. Глюкоза служит основным источником энергии.

Состав

Состав, г/л:

Конечный pH (при 25 °C): 7,3 $\pm$ 0,1.

Методика приготовления и использования

Приготовление среды

1. Суспендируйте 52,80 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. ЗАПРЕЩЕНО АВТОКЛАВИРОВАТЬ.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Подготовка инокулята

1. Выберите пять отдельных колоний размером около 1 мм из 24-часовой культуры, выращенной на агаре Сабуро с декстрозой (M063) при 35 $\pm$ 2 °C.
2. Суспендируйте колонии в 5 мл стерильного 0,85 % раствора NaCl.
3. Перемешайте суспензию на вортексе и доведите мутность до стандарта 0,5 по МакФарланду ($1 \times 10^6$ – $5 \times 10^6$ клеток/мл).

Процедура тестирования

1. Используйте стерильные чашки с HiCrome агаром Мюллера-Хинтона толщиной слоя около 4 мм.
2. С помощью стерильного нетоксичного ватного тампона нанесите инокулят на поверхность агара зигзагообразными движениями в трёх направлениях, поворачивая чашку на 60° после каждого прохода.
3. Дайте инокуляту подсохнуть 5–15 минут с закрытой крышкой.
4. Асептически наложите диски с антимикотиками, соблюдая расстояние между центрами не менее 24 мм (не более 5 дисков на чашку 100 мм или 12 дисков на чашку 150 мм).
5. В течение 15 минут после наложения дисков поместите чашки в инкубатор при 35 $\pm$ 2 °C в перевернутом виде.
6. Оцените результат через 20–24 часа инкубации. Если рост недостаточен, чтение проводится через 48 часов.

Технические характеристики

Контроль качества и культуральные характеристики

Рост тестовых организмов наблюдается через 24–48 часов при 33–37 °C.

Ограничения и предостережения

• Среда предназначена только для тестирования чистых культур.
• Плотность инокулята влияет на размер зоны заторможения: избыточный инокулят может привести к уменьшению зон, недостаточный — к их увеличению.
• Требовательные микроорганизмы могут не расти на данной среде.
• Интенсивность окраски некоторых видов Candida может варьироваться в зависимости от активности ферментов.
• Результаты in vitro могут отличаться от клинических результатов in vivo.
• Для окончательного подтверждения требуются дополнительные биохимические и серологические тесты.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 15–25 °C в сухом проветриваемом месте. Из-за гигроскопичности продукта неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Утилизация: использованные среды и материалы, контактировавшие с клиническими образцами, должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации.