HiMedia M2067-100G HiCrome агар Мюллера-Хинтона (для противогрибковых тестов)

Питательная хромогенная агаровая среда HiMedia M2067-100G HiCrome агар Мюллера—Хинтона (для противогрибковых тестов) производства HiMedia предназначена для дифференциации дрожжей и определения чувствительности к противогрибковым препаратам. HiMedia M2067-100G применяется для изолированных микроорганизмов из клинических образцов и рекомендована для тестирования чистых культур методом диффузии дисков.

Назначение

Среда рекомендована для:

• хромогенной дифференциации дрожжей из клинических образцов;
• определения чувствительности дрожжей к противогрибковым препаратам;
• проведения тестирования методом диффузии противогрибковых дисков через агаровый гель;
• идентификации изолятов Candida непосредственно при первичном выделении по окраске колоний.

Тип образца: изолированный микроорганизм из клинического образца.

Состав

Состав на 1 л:

Технические характеристики

• Наименование среды: HiCrome агар Мюллера—Хинтона для противогрибкового тестирования
• Артикул: M2067-100G
• Назначение изделия: агар
• Форма выпуска: порошок
• Масса: 100 г
• Тип продукта: HiCrome™
• Тип упаковки: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности)
• Происхождение: животное
• Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,1
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 5,28 % масс./об. при 25 °C; pH 7,3 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,10–7,50

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эксплуатационных характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Среда Мюллера—Хинтона первоначально была разработана как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных видов. Модифицированный агар Мюллера—Хинтона, соответствующий требованиям CLSI для противогрибкового тестирования, применяется для диффузии противогрибковых препаратов, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель.

Добавление глюкозы до конечной концентрации 2 % обеспечивает подходящие условия для роста грибов. Агар Мюллера—Хинтона также применялся для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией препарата.

HiCrome агар Мюллера—Хинтона предназначен для определения чувствительности к противогрибковым препаратам с одновременной хромогенной дифференциацией микроорганизмов.

Acicase является источником азотсодержащих и углеродсодержащих соединений, аминокислот с длинной цепью, серы и других необходимых питательных веществ. Гидролиз крахмала приводит к образованию декстрозы, которая служит источником энергии. Глюкоза обеспечивает источник энергии для грибковых культур. Крахмал действует как защитный коллоид против токсичных веществ, присутствующих в среде.

Фермент β-N-ацетилгалактозаминидаза, продуцируемый Candida albicans, используется для хромогенной дифференциации. Введение хромогенных или флуорогенных субстратов гексозаминидазы в питательную среду способствует идентификации изолятов C. albicans непосредственно на этапе первичного выделения.

Характерная окраска колоний:

• C. albicans — гладкие колонии светло-зелёного цвета;
• C. tropicalis — выпуклые колонии от синего до металлически-синего цвета;
• C. glabrata — гладкие колонии кремового или белого цвета;
• C. krusei — пушистые колонии фиолетового цвета.

Приготовление среды

1. Взвесьте 52,80 г порошка и суспендируйте в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Не стерилизуйте в автоклаве.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика проведения анализа

Эксплуатационные характеристики партии проверены и стандартизированы в соответствии с действующей редакцией документа CLSI M44-A2 «Метод определения чувствительности дрожжей к противогрибковым препаратам методом диффузии дисков».

Подготовка инокулята

1. Используйте культуру возрастом 24 ч, выращенную на агаре Сабуро с декстрозой M063 при температуре 35 ± 2 °C.
2. Отберите пять отдельных колоний размером приблизительно 1 мм.
3. Суспендируйте колонии в 5 мл стерильного физиологического раствора концентрацией 0,85 %.
4. Перемешайте полученную суспензию на вихревом смесителе.
5. Отрегулируйте мутность суспензии до значения, обеспечивающего концентрацию 1 × 10⁶–5 × 10⁶ клеток/мл, что соответствует стандарту 0,5 МакФарланда.

Тестирование чувствительности дисками

1. Подготовьте чашки с агаром Мюллера—Хинтона HiCrome для определения чувствительности к противогрибковым дискам. Слой среды в чашке должен быть стерильным и иметь толщину приблизительно 4 мм.
2. Погрузите стерильный нетоксичный ватный тампон на деревянном аппликаторе в стандартизированный инокулят. Мутность суспензии должна обеспечивать полусливной рост на чашке Петри.
3. Плотно прижмите смоченный тампон к верхней внутренней стенке пробирки, чтобы удалить избыток жидкости.
4. Засейте всю поверхность агара тампоном три раза, поворачивая чашку на 60° перед каждым последующим нанесением штрихов.
5. Оставьте инокулят высыхать на 5–15 мин при закрытой крышке.
6. Нанесите диски с соблюдением правил асептики.
7. Располагайте диски так, чтобы расстояние между их центрами составляло не менее 24 мм. На чашку диаметром 150 мм помещайте не более 12 дисков, на чашку диаметром 100 мм — не более 5 дисков.
8. Переверните чашки и поместите их в инкубатор, установленный на 35 ± 2 °C, не позднее чем через 15 мин после нанесения дисков.
9. Исследуйте каждую чашку после 20–24 ч инкубации.
10. При правильно выполненном посеве зоны ингибирования должны иметь равномерно круглую форму, а рост культуры — образовывать полусливной газон.
11. Проводите считывание через 48 ч только при недостаточном росте после 24 ч инкубации.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,7%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется опалесцирующий гель жёлтого или янтарного цвета.

Культуральные характеристики

Обильный рост тестовых микроорганизмов наблюдался на агаре Мюллера—Хинтона HiCrome в течение 24–48 ч при температуре 33–37 °C с образованием зон ингибирования для соответствующих концентраций антибиотиков.