Питательная хромогенная агаровая среда HiMedia M2062I-500G HiCrome агар для выделения Cronobacter (CCI), производство HiMedia, предназначена для выделения и идентификации Cronobacter sakazakii из пищевой продукции по составу и характеристикам, соответствующим ISO 22964:2017. Среда применяется после неселективного и селективного обогащения образца; типичные колонии Cronobacter sakazakii и Cronobacter muytjensii имеют синий или сине-зелёный цвет.

Назначение и область применения

Среда рекомендована для выделения и идентификации Cronobacter sakazakii из пищевых продуктов.

Тип образца

Согласно ISO 22964:2017, среда применяется для анализа:

• пищевых продуктов и ингредиентов, предназначенных для употребления человеком и кормления животных;
• образцов окружающей среды в зонах производства и обращения с пищевой продукцией.

Состав и рабочие характеристики среды соответствуют требованиям ISO 22964:2017.

Состав

M2062I — HiCrome агар для выделения Cronobacter (CCI Agar):

Конечный pH после стерилизации при 25 °C: 7,3 ± 0,2.

** Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Триптон эквивалентен триптическому перевариванию казеина.

Принцип действия и интерпретация результатов

Представители рода Enterobacter широко распространены в природе и встречаются в пресной воде, почве, сточных водах, на растениях и овощах, а также в фекалиях животных и человека.

Cronobacter sakazakii тесно связан с развитием неонатального менингита и сепсиса. Агар для выделения Cronobacter HiCrome рекомендован комитетом ISO для выделения и идентификации C. sakazakii из пищевых образцов.

Хромогенный субстрат 5-бром-4-хлор-3-индолил α-D-глюкопиранозид специфически расщепляется C. sakazakii, в результате чего формируются сине-зелёные колонии. Другие микроорганизмы, не расщепляющие этот субстрат, образуют бесцветные колонии.

Функции компонентов среды:

• триптон и дрожжевой экстракт обеспечивают азотистые и углеродистые соединения, аминокислоты с длинной цепью, витамины и другие необходимые питательные вещества;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды;
• дезоксихолат натрия подавляет сопутствующую грамположительную микрофлору.

* Ранее вид назывался Enterobacter sakazakii.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 32,4 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм² (примерно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Обработка образцов по ISO 22964:2017

Неселективное предварительное обогащение в BPW (M1494I)

Образцы массой 10 г или объёмом 10 мл предварительно обогащают в 90 мл буферной пептонной воды (BPW) и инкубируют при 34–38 °C в течение 18 ± 2 ч.

Селективное обогащение в CSB

0,1 мл обогащённой культуры из BPW (M1494I) вносят в бульон для селективного обогащения Cronobacter (CSB) и инкубируют при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.

Идентификация на хромогенном агаре CCI

10 мкл селективно обогащённой культуры из CSB (M1786I) высевают на агар для выделения Cronobacter CCI (M2062I) и инкубируют при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.

Подтверждение

Типичные колонии отбирают с хромогенного агара, очищают пересевом на неселективный агар, например триптиказо-соевый агар (TSA), и подвергают биохимической характеристике.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: M2062I-500G
• Назначение изделия: агар
• Масса: 500 г
• Тип продукта: HiCrome™
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: HDPE
• Происхождение: животное
• Расход среды: 32,4 г/л
• Конечный pH после стерилизации при 25 °C: 7,3 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,10–7,50
• Условия реакции: водный раствор с концентрацией 3,24 % масс./об. при 25 °C

Контроль качества

Внешний вид и свойства приготовленной среды

• Внешний вид сухой среды: однородный сыпучий порошок кремового, жёлтого или розового цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: жёлтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель в чашках Петри.
• Культуральные характеристики: оцениваются после инкубации при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Каждая партия среды проверяется на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). Для любого специфического микроорганизма, не указанного в COA, рекомендуется проводить валидацию среды с учётом задач пользователя.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 15–25 °C.
• Условия хранения: плотно закрытый контейнер, сухое проветриваемое помещение, защита от экстремальных температур и источников воспламенения.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты истечения срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия контейнер необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде.
• Из-за гигроскопичности продукта при неправильном хранении возможно образование комков.
• После каждого использования контейнер следует плотно закрывать.
• Оптимальные рабочие характеристики обеспечиваются при использовании в течение установленного срока годности.
• При получении хранить при 15–25 °C.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед вскрытием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила работы микробиологической лаборатории.
• При обращении с образцами применяйте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Указания по безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Незначительные различия в окраске могут наблюдаться в зависимости от продукции ферментов микроорганизмом и использования субстрата в составе среды.
2. Отдельные микроорганизмы различаются по требованиям к росту и могут демонстрировать вариабельные характеристики роста на среде.
3. Для подтверждения результатов необходимо провести дополнительные биохимические тесты.
4. Рабочие характеристики среды ожидаются при применении в соответствии с указаниями на этикетке, в пределах срока годности и при соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо утилизировать безопасным способом с применением автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов следует соблюдать установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцом, необходимо обеззараживать и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Отличие методики

В составе CCI Agar используется хромогенный субст