Питательная среда HiMedia M2046I-500G Основа агара с триптоном, дрожжевым экстрактом и сульфитом натрия представляет собой порошковую основу массой 500 г. Применяется для количественного определения Clostridium perfringens в пробах воды и требует добавления селективной добавки после автоклавирования.

Назначение

Основа рекомендована для количественного определения Clostridium perfringens в пробах воды методом мембранной фильтрации. Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям ISO 14189:2013.

Состав

Основа агара с триптоном, дрожжевым экстрактом и сульфитом натрия M2046I

Селективная добавка после автоклавирования

Селективная добавка T.S.C. — FD014

— ферментативный гидролизат казеина.

— ферментативный гидролизат сои.

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эффективности.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 21,0 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении ≈0,10 МПа (15 фунтов на квадратный дюйм) при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки T.S.C. (FD014).
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Триптон-сульфит-циклосериновый агар (TSC) первоначально разработан Harmon и соавторами для количественного определения C. perfringens в пищевых продуктах. Среда TSC применяется для количественного выделения C. perfringens с подавлением роста других факультативных анаэробов.

Основа агара с триптоном, дрожжевым экстрактом и сульфитом натрия рекомендована комитетом ISO для выделения C. perfringens из проб воды методом мембранной фильтрации.

Триптон, соевый пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают соединения азота, углерод, аминокислоты с длинной цепью, серу, витамины группы B и микроэлементы, необходимые для роста клостридий. Метабисульфит натрия и цитрат аммонийного железа служат индикаторной системой восстановления сульфита, при котором образуются колонии чёрного цвета. D-циклосерин в составе добавки FD014 обеспечивает селективное выделение C. perfringens за счёт ингибирования сопутствующей микрофлоры.

Исследуемую пробу воды фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм. Мембранный фильтр помещают на основу агара с триптоном, дрожжевым экстрактом и сульфитом натрия и инкубируют в анаэробных условиях при 43–45 °C в течение 18–24 ч. Сульфит реагирует с солями железа с образованием сульфида, в результате чего формируются колонии чёрного либо серого или жёлто-коричневого цвета.

Подтверждающий тест

1. Нанесите часть роста 24-часовой культуры Clostridium perfringens с кровяного агара, основы агара Columbia или триптон-соевого агара на стерильную фильтровальную бумагу. Культуры должны быть инкубированы анаэробно при 34–38 °C.
2. Добавьте на колонии на фильтровальной бумаге 2–3 капли реагента для определения кислой фосфатазы R096.
3. Наблюдайте за появлением интенсивного пурпурного окрашивания в течение 3–4 мин.

Появление интенсивного пурпурного окрашивания считается положительной реакцией для Clostridium perfringens.

Тип образца

• Пробы воды.

Отбор и обращение с образцами

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно установленным руководствам и местным стандартам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры безопасности

• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности, установленные действующими руководствами.
• Правила безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

Для дальнейшей идентификации настоятельно рекомендуется проводить подтверждающий тест.

Оценка эффективности

Эффективность среды обеспечивается при приготовлении и применении в соответствии с указаниями на этикетке и использовании в пределах срока годности при хранении в рекомендованных температурных условиях.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или коричневато-жёлтый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель янтарного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 4,2 % масс./об. при 25 °C:

• pH: 7,6 ± 0,2.

Диапазон pH

• pH: 7,40–7,80.

Культуральная характеристика

Продуктивность

Культуральную реакцию наблюдали после инкубации в анаэробной атмосфере при 44 ± 1 °C в течение 21 ± 3 ч с добавлением стерильной селективной добавки T.S.C. (FD014). Степень восстановления принята за 100 % для роста бактерий на референсной среде — соево-казеиновом агаре (триптон-соевом агаре).

Селективность

Культуральную реакцию наблюдали после инкубации в анаэробной атмосфере при 44 ± 1 °C в течение 21 ± 3 ч с добавлением стерильной селективной добавки T.S.C. (FD014).