HiMedia M2012-500G Основа бульона Борде-Жангу

Порошкообразная питательная среда HiMedia M2012-500G Основа бульона Борде-Жангу массой 500 г предназначена для селективного обогащения культур Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis. Основа применяется при исследовании клинических образцов, включая мокроту, а приготовленную среду хранят при 2–8 °C.

Назначение

Основа бульона Борде—Жангу предназначена для селективного обогащения Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis. Продукт используют для приготовления питательной среды с глицерином, дефибринированной кровью и селективной добавкой Bos Selective Supplement (FD004).

Состав

Для приготовления 1 л среды:

Конечный pH при 25 °C: 6,7 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих параметров.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 20,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
2. При необходимости нагрейте смесь до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 15–20 % стерильной свежей дефибринированной крови овцы, кролика, человека или лошади.
6. Для повышения селективности в асептических условиях добавьте восстановленное содержимое двух флаконов селективной добавки Bos Selective Supplement (FD004).
7. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные пробирки или колбы в необходимом объёме.

Принцип действия и интерпретация

Среды Борде—Жангу первоначально были разработаны для культивирования видов Bordetella. Bordetella pertussis является возбудителем коклюша. С использованием метода чашки с кашлевым отделяемым B. pertussis может быть выделена из мазков и аспиратов из глотки, носоглоточного секрета и передненосовых мазков.

В модифицированном варианте исходной среды 50 % человеческой или кроличьей крови заменяют на 15 % овечьей крови. Это повышает обогащённость среды и облегчает выявление B. pertussis по гемолитической реакции. Обогащение базовой среды 25 % человеческой крови способствует выявлению видов Mycobacterium при небольшом посевном объёме мокроты и используется при определении чувствительности к стрептомицину.

Среда содержит питательные компоненты, поддерживающие обильный рост видов Bordetella. Среду также можно применять для массового культивирования B. pertussis при производстве вакцин и для поддержания запасных культур. Основа бульона Борде—Жангу готовится без агара и предназначена для селективного обогащения видов Bordetella.

Функции компонентов:

• картофельный настой и пептон служат источниками углерода и азота, длинноцепочечных аминокислот и необходимых питательных веществ;
• глицерин и обогащение кровью обеспечивают дополнительные питательные вещества;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие.

Инкубацию проводят во влажной камере при относительной влажности 60 % и температуре 37 °C в течение до 7 суток. Перед использованием среду не следует пересушивать.

Через 40 ч колонии B. pertussis приобретают гладкую, выпуклую, блестящую форму и могут иметь зону гемолиза. Некоторые штаммы Bordetella не проявляют гемолитической активности. Для подтверждения результата следует выполнять серодиагностику и биохимические тесты.

Для повышения селективности среды в отношении Bordetella можно использовать антибиотики, включая пенициллин, метициллин и цефалексин. Цефалексин подавляет нежелательный рост носоглоточной микрофлоры и значительно повышает частоту выделения видов Bordetella. Цефалексин применяют в концентрации 40 мг/л; используется добавка FD004. В качестве противогрибкового агента в среду можно добавлять амфотерицин B в концентрации 10 мкг/мл.

Для выделения B. pertussis из образцов используют стандартные процедуры. Чашки инкубируют во влажной камере при 35–37 °C в течение 7 суток и ежедневно осматривают — с использованием или без использования препаровального микроскопа с косым освещением — для выявления B. pertussis.

Тип образца

Клинические образцы: мокрота.

Сбор и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами применяют соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами и лабораторными процедурами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения метода

1. Некоторые виды Haemophilus могут расти на средах для выделения Bordetella и давать перекрёстную реакцию с антисыворотками к B. pertussis.
2. Колонии B. pertussis могут быть не видны без микроскопа в течение 2–4 суток.

Рабочие характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованных температурных условиях.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный свободно сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий раствор светло-жёлтого цвета.
• После добавления глицерина и 15 % об./об. стерильной дефибринированной крови: в пробирках образуется мутный раствор вишнёво-красного цвета.

Реакция

Реакция 2,0 % масс./об. водного раствора при 25 °C: pH 6,7 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,50–6,90.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления глицерина, 15 % об./об. стерильной дефибринированной крови и селективной добавки Bos Selective Supplement (FD004), после инкубации при 35–37 °C в течение 3–4 суток.

* Соответствующие номера WDCM.

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения сухого продукта: плотно закрытый контейнер.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вск