HiMedia M2009-500G Основа дифференциального HiCrome агара для L. monocytogenes

Питательная среда HiMedia M2009-500G Основа дифференциального HiCrome агара для L. monocytogenes производства HiMedia предназначена для селективного и дифференциального выделения, количественного определения и идентификации видов Listeria по активности фосфатидилхолинфосфолипазы C (PCPLC). Основа применяется для анализа пищевых образцов с последующей индикацией колоний Listeria по хромогенному субстрату и активности PCPLC; масса упаковки составляет 500 г.

Назначение

Среда рекомендована для селективного и дифференциального выделения, количественного определения и идентификации Listeria monocytogenes и других видов Listeria на основании активности фосфатидилхолинфосфолипазы C (PCPLC).

Тип образца: пищевые продукты.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих характеристик.

Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию из 33,60 г сухой основы в 480 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте стерильное содержимое одного флакона раствора лецитина FD332 и стерильно регидратированное содержимое селективной добавки PANC FD333.
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Listeria monocytogenes — грамположительный пищевой патоген человека, вызывающий тяжёлые инфекции у беременных женщин, которые могут приводить к выкидышу, мертворождению, рождению ребёнка с неонатальным листериозом и менингитом, а также к первичной бактериемии у взрослых и детей.

Патогенность Listeria ivanovii для человека остаётся неопределённой. L. monocytogenes и L. innocua обладают сходными биохимическими свойствами и не могут быть дифференцированы на традиционных средах PALCAM и Oxford.

Основа дифференциального агара HiCrome для L. monocytogenes предназначена для селективного и дифференциального выделения видов Listeria на основании утилизации хромогенного субстрата и лецитиназной активности — фосфатидилхолинфосфолипазы C (PCPLC). Фосфатидилинозитолфосфолипаза C (PI-PLC) и PC-PLC являются основными факторами вирулентности и продуцируются только патогенными L. monocytogenes и Listeria ivanovii.

Функции компонентов среды:

• пептон, триптон, дрожжевой экстракт и пируват натрия обеспечивают азотистые и углеродистые соединения, аминокислоты с длинной цепью, витамины и необходимые питательные вещества для роста;
• мальтоза является сбраживаемым углеводом;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• фосфат выполняет буферную функцию;
• хлорид лития и селективная добавка FD333 подавляют сопутствующую микрофлору и обеспечивают рост видов Listeria;
• виды Listeria гидролизуют хромогенный субстрат с образованием колоний зелёного цвета;
• раствор лецитина FD332 используется для выявления активности PCPLC.

Дифференциация видов Listeria основана на активности фосфатидилхолинфосфолипазы C (PCPLC). L. monocytogenes и L. ivanovii проявляют активность PCPLC, которая определяется по образованию непрозрачного ореола вокруг колонии.

Требования к образцам и обращению

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила работы в микробиологической лаборатории при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения

1. Отдельные микроорганизмы различаются по требованиям к росту и могут демонстрировать неодинаковые характеристики роста на среде.
2. Незначительные различия окраски могут наблюдаться в зависимости от утилизации субстрата конкретным микроорганизмом.
3. Необходимо выполнить дополнительное подтверждение с использованием тестирования чувствительности.

Контроль качества

Ожидаемые характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно указаниям на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,4%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется гель светло-янтарного цвета с опалесценцией.
• Реакция: реакция 6,72%-ного водного раствора при 25 °C.
• pH: 7,00–7,40.
• Измеренный pH: 7,2 ± 0,2.

Культуральные характеристики определяют с добавлением стерильной селективной добавки PANC FD333 и раствора лецитина FD332 после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Хранение и срок годности

• Условия хранения сухой основы: при температуре 15–25 °C в плотно закрытом контейнере.
• Условия хранения приготовленной среды: при температуре 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрыв флакон, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывайте контейнер.
• Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в пределах установленного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцом, необходимо обеззараживать и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Технические характеристики