Хромогенная питательная среда HiCrome Chromogenic Coliform Agar (CCA) HiMedia M1991I-500G (500 г) — агар в порошке для микробиологического анализа воды. Среда предназначена для выявления и количественного определения Escherichia coli и колиформных бактерий; подготовленную среду инкубируют при 36 ± 2 °C в течение 21 ± 3 ч.

Назначение

Среда рекомендована для выявления Escherichia coli и колиформных бактерий в пробах воды. Состав и критерии эффективности соответствуют требованиям ISO 9308-1:2014 к хромогенному колиформикробному агару (CCA) для мембранно-фильтрационного метода.

Тип образца: вода.

Состав

Формула среды M1991I, г/л:

Ферментативный гидролизат казеина.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных параметров эффективности.

Конечный показатель pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2.

Технические характеристики

Принцип измерения и интерпретация

HiCrome Chromogenic Coliform Agar — селективная среда для количественного определения Escherichia coli и колиформных бактерий методом, рекомендованным ISO 9308-1:2014.

Среда содержит три хромогенных субстрата:

• β-D-галактозидаза, продуцируемая колиформными бактериями, расщепляет 6-хлор-3-индоксил-β-D-галактопиранозид с образованием колоний от розового до красного цвета;
• β-D-глюкуронидаза, продуцируемая Escherichia coli, расщепляет 5-бром-4-хлор-3-индоксил-β-D-глюкуроновую кислоту;
• при расщеплении обоих хромогенов колонии Escherichia coli приобретают тёмно-синюю или фиолетовую окраску.

Третий хромоген — ИПТГ — усиливает цветную реакцию. Добавление L-триптофана улучшает индольную реакцию и повышает надёжность выявления.

Триптон, пируват натрия и сорбитол обеспечивают микроорганизмы азотистыми соединениями, сбраживаемыми углеводами и другими необходимыми питательными веществами. Фосфаты выполняют буферную функцию. Состав среды способствует восстановлению и быстрому росту даже сублетально повреждённых колиформных бактерий.

Tergitol-7 подавляет рост грамположительных и некоторых грамотрицательных бактерий, не относящихся к колиформным.

Среду можно инокулировать методом заливки в чашку, поверхностным высевом на застывшую среду или мембранно-фильтрационным методом. Для подтверждения E. coli на тёмно-синюю или фиолетовую колонию наносят каплю реактива Ковача; появление вишнёво-красной окраски указывает на положительную реакцию.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 30,92 г сухой среды, что соответствует массе обезвоженной среды на 1 л, в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Не автоклавируйте приготовленную среду.
4. Не перегревайте среду.
5. Охладите раствор до 45–50 °C.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Фильтрация образца

1. Профильтруйте 100 мл образца через мембранный фильтр.
2. Минимальный объём фильтруемой пробы должен составлять 10 мл; при необходимости используйте разведение. Это необходимо для равномерного распределения бактерий на мембранном фильтре.

Инкубация и дифференциация

1. После фильтрации поместите мембранный фильтр на поверхность хромогенного колиформикробного агара, не допуская образования воздуха под фильтром.
2. Переверните чашку Петри.
3. Инкубируйте при 36 ± 2 °C в течение 21 ± 3 ч.
4. Оцените изменение окраски колоний на мембранном фильтре.

Подтверждение

Для подтверждения проводят биохимические и серологические тесты. Дополнительные биохимические и серологические исследования необходимы для окончательной идентификации.

Контроль качества

Внешний вид порошка: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с гелем 1,5 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется светло-жёлтый опалесцирующий гель.

Реакция: реакция 3,09 % масс./об. водного раствора при 25 °C.

Показатель pH по контролю качества: 6,60–7,00.

Продуктивность

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 36 ± 2 °C в течение 21 ± 3 ч. Степень восстановления принимают за 100 % для роста бактерий на референтной среде — соево-казеиновом агаре (триптон-соевом агаре).

* Соответствующие номера WDCM.

Окраску оценивают на чашке или на мембранном фильтре.

Klebsiella aerogenes ранее обозначали как Enterobacter aerogenes.

Селективность

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 36 ± 2 °C в течение 21 ± 3 ч. В указанных условиях Enterococcus faecalis подавляется.

Специфичность

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 36 ± 2 °C в течение