Питательная хромогенная среда HiMedia M1991I-100G HiChrome хромогенный колиформный агар (CCA) — порошковый агар для микробиологического анализа воды. Среда предназначена для выявления Escherichia coli и колиформных бактерий в пробах воды с инкубацией при 36 ± 2 °C в течение 21 ± 3 ч.

Назначение

Среда рекомендована для выявления и количественного определения Escherichia coli и колиформных бактерий в пробах воды. Состав и критерии эффективности соответствуют требованиям ISO 9308-1:2014 к хромогенному колиформному агару (CCA).

Тип образца: пробы воды.

Состав

Эквивалентная масса обезвоженной среды: 30,92 г/л.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных эксплуатационных характеристик.

— Ферментативный гидролизат казеина.

Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2.

Принцип измерения и интерпретация

HiCrome хромогенный агар представляет собой селективную среду, рекомендованную ISO для количественного определения Escherichia coli и колиформных бактерий.

Среда содержит три хромогенных субстрата:

• β-D-галактозидаза, вырабатываемая колиформными бактериями, расщепляет 6-хлор-3-индоксил-β-D-галактопиранозид с образованием колоний от розового до красного цвета;
• β-D-глюкуронидаза, вырабатываемая Escherichia coli, расщепляет 5-бром-4-хлор-3-индоксил-β-D-глюкуроновую кислоту;
• в результате расщепления обоих хромогенов колонии E. coli приобретают тёмно-синий или фиолетовый цвет.

Третий хромоген — ИПТГ — усиливает цветную реакцию. Добавление L-триптофана улучшает индольную реакцию и повышает надёжность выявления.

Триптон, пируват натрия и сорбитол обеспечивают азотистые соединения, сбраживаемые углеводы и другие необходимые питательные вещества для роста микроорганизмов. Фосфаты выполняют функцию буфера. Состав среды способствует восстановлению и быстрому росту даже сублетально повреждённых колиформных бактерий. Тергитол-7 подавляет рост грамположительных, а также некоторых грамотрицательных бактерий, не относящихся к колиформным.

Для посева используют один из следующих вариантов:

• метод заливных чашек;
• поверхностное распределение пробы по поверхности застывшей среды;
• мембранную фильтрацию.

Для подтверждения E. coli на колонию тёмно-синего или фиолетового цвета наносят каплю реактива Ковача. Образование вишнёво-красного окрашивания указывает на положительную реакцию.

Приготовление среды

1. Приостановите 30,92 г обезвоженной среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Не автоклавируйте приготовленную среду.
4. Не допускайте перегрева.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Подготовка и обработка проб

Мембранная фильтрация

1. Профильтруйте 100 мл пробы через мембранный фильтр.
2. Минимальный объём фильтруемой пробы должен составлять 10 мл либо соответствующий объём её разведения, чтобы обеспечить равномерное распределение бактерий на мембранном фильтре.
3. После фильтрации перенесите мембранный фильтр на поверхность HiCrome хромогенного колиформного агара.
4. Убедитесь, что под мембранным фильтром не осталось воздуха.
5. Переверните чашку Петри.
6. Инкубируйте при 36 ± 2 °C в течение 21 ± 3 ч.
7. Оцените изменение окраски колоний непосредственно на мембранном фильтре.

Подтверждение результатов

Для подтверждения проводят биохимические и серологические тесты. Дополнительные биохимические и серологические исследования необходимы для окончательного подтверждения.

Технические характеристики

• Наименование среды: HiCrome хромогенный колиформный агар (CCA Agar)
• Артикул среды: M1991I
• Артикул фасовки: M1991I-100G
• Производитель: HiMedia
• Назначение изделия: агар
• Физическая форма: порошок
• Масса: 100 г
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Происхождение: животное
• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,60–7,00
• Температура инкубации: 36 ± 2 °C
• Время инкубации: 21 ± 3 ч
• Метод посева: заливные чашки, поверхностный посев или мембранная фильтрация
• Метод подтверждения: биохимические и серологические тесты

Контроль качества

Внешний вид и свойства

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с гелем 1,5%-ного агара.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется гель светло-жёлтого цвета с опалесценцией.
• Реакция: реакция 3,09%-ного водного раствора при 25 °C.
• pH: 6,8 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,60–7,00.

Продуктивность

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 36 ± 2 °C в течение 21 ± 3 ч. Степень восстановления принимают за 100 % при росте бактерий на референтной среде — соево-казеиновом агаре (триптиказо-соевом агаре).

| Организм | Посевная доза (КОЕ) | Рост | Восстановление | Цвет колонии # | | --- | --- | --- | --- |