HiMedia M1991I-100G HiChrome хромогенный колиформный агар (CCA)

HiMedia·Арт.: 0049590·Арт. произв.: M1991I-100G

HiMedia M1991I-100G HiChrome хромогенный колиформный агар (CCA)

Name: HiMedia M1991I-100G HiChrome хромогенный колиформный агар (CCA)
Brand: HiMedia
SKU: 0049590
Price: 24093 RUB
Availability: PreOrder

Под заказ24 093 руб.

Хромогенный колиформный агар (CCA) HiMedia M1991I-100G предназначен для обнаружения Escherichia coli и колиформных бактерий в пробах воды. Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям стандарта ISO 9308-1:2014.

Описание

Принцип измерения

HiCrome® Chromogenic Agar является селективной средой, содержащей три хромогенных субстрата для дифференциации микроорганизмов:

Фермент $\beta$ -D-галактозидаза, вырабатываемый колиформами, расщепляет 6-хлоро-3-индоксил- $\beta$ -D-галактопиранозид, в результате чего образуются колонии от розового до красного цвета.
Фермент $\beta$ -D-глюкуронидаза, вырабатываемый E. coli, расщепляет 5-бром-4-хлоро-3-индоксил- $\beta$ -D-глюкуроновую кислоту.
Колонии E. coli приобретают темно-синий или фиолетовый цвет за счет расщепления обоих хромогенов.
Третий хромоген, IPTG (изопропил- $\beta$ -D-тиогалактопиранозид), усиливает интенсивность цветовой реакции.
Добавление L-триптофана улучшает индольную реакцию, что повышает надежность идентификации.

Триптон, пируват натрия и сорбитол обеспечивают азотистые вещества, ферментируемые углеводы и другие питательные компоненты. Фосфаты выполняют роль буфера. Состав среды способствует восстановлению и быстрому росту даже сублетально поврежденных колиформ. Tergitol-7 подавляет рост грамположительных и некоторых грамотрицательных бактерий, не относящихся к колиформам.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

Суспендируйте 30,92 г сухой среды (эквивалентный вес на литр) в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов. Внимание: не автоклавировать, не перегревать.
Охладите до 45–50 °C.
Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Пробоподготовка и посев

Среда может использоваться методом глубокого посева, поверхностного посева или методом мембранной фильтрации.

Метод фильтрации:

Профильтруйте 100 мл пробы через мембранный фильтр. Минимальный объем фильтрации должен составлять 10 мл (или разведения) для обеспечения равномерного распределения бактерий.
Поместите мембранный фильтр на поверхность агара HiCrome® CCA, следя за тем, чтобы под мембраной не осталось пузырьков воздуха.
Переверните чашку Петри и инкубируйте при температуре 36 °C $\pm$ 2 в течение 21 $\pm$ 3 часов.

Интерпретация и подтверждение

Оцените изменение цвета колоний на мембранном фильтре. Для подтверждения E. coli на темно-синие или фиолетовые колонии нанесите каплю реактива Ковакса: появление вишнево-красного окрашивания свидетельствует о положительной реакции. Для окончательного подтверждения проводятся биохимические и серологические тесты.

Технические характеристики

Состав (ISO 9308-1:2014)

Состав на 1 л среды:

Компонент	г/л
Триптон	1,000
Экстракт дрожжей	2,000
Натрия хлорид	5,000
Натрия дигидрофосфат, 2H₂O	2,200
Натрия гидрофосфат двунатриевый	2,700
Пируват натрия	1,000
Сорбитол	1,000
Триптофан	1,000
Tergitol-7	0,150
6-хлоро-3-индоксил- $\beta$ -D-галактопиранозид	0,200
5-бром-4-хлоро-3-индоксил- $\beta$ -D-глюкуроновая кислота, циклогексиламмониевая соль моногидрат (X-beta-G-глюкуронид CHX соль)	0,100
IPTG (изопропил- $\beta$ -D-тиогалактопиранозид)	0,100
Агар	15,000

Конечный pH (при 25 °C): 6,8 $\pm$ 0,2

Общие параметры

Вес: 100 г
Физическая форма: порошок
Тип продукта: HiCrome™
Материал упаковки: ПНД (HDPE)
Происхождение компонентов: животного

Контроль качества

Внешний вид: однородный свободнотекущий порошок от кремового до желтого цвета.
Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % агаром.
Цвет и прозрачность готовой среды: светло-желтый опалесцирующий гель.
pH водного раствора (3,09 % w/v при 25 °C): 6,8 $\pm$ 0,2 (диапазон 6,60–7,00).

Культуральные характеристики

Инкубация при 36 °C $\pm$ 2 в течение 21 $\pm$ 3 часов. Скорость восстановления считается 100 % при росте на контрольной среде — сое-казеиновом дигест-агаре (Tryptone Soya Agar).

Организм	Посевная доза (КОЕ)	Рост	Восстановление	Цвет колонии
Продуктивность
Escherichia coli ATCC 25922 (00013)	50–100	обильный	$\ge$ 70 %	темно-синий / фиолетовый
Escherichia coli ATCC 8739 (00012)	50–100	обильный	$\ge$ 70 %	темно-синий / фиолетовый
Citrobacter freundii ATCC 43864 (00006)	50–100	обильный	$\ge$ 70 %	розовый / красный
Klebsiella aerogenes ATCC 13048 (00175)	50–100	обильный	$\ge$ 70 %	розовый / красный
Селективность
Enterococcus faecalis ATCC 19433 (00009)	$\ge 10^4$	подавлен	-	-
Специфичность
Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 (00024)	$10^3$ – $10^4$	рост	-	бесцветные

Условия эксплуатации и хранения

Хранение сухой среды: в плотно закрытом контейнере при температуре 15–25 °C.
Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия плотно закрывать крышку во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Ограничения применения

Различные организмы могут иметь разные требования к росту и демонстрировать вариативность паттернов роста на данной среде.
Каждая партия протестирована на микроорганизмы, указанные в сертификате анализа (COA). При необходимости использования для специфических микроорганизмов, не указанных в COA, рекомендуется провести валидацию среды.
Для окончательного подтверждения результатов необходимы дополнительные биохимические и серологические тесты.