Хромогенная питательная среда HiMedia M1991AI-500G HiCrome хромогенный колиформный агар с 1% агара — порошковый агар массой 500 г для микробиологического анализа воды. Среда предназначена для выявления и количественного определения Escherichia coli и колиформных бактерий; при приготовлении среду нельзя автоклавировать и перегревать.

Назначение

Среда рекомендована для выявления Escherichia coli и колиформных бактерий в пробах воды. Состав и критерии эффективности соответствуют требованиям ISO 9308-1:2014 к определению Escherichia coli и колиформных бактерий методом мембранной фильтрации.

Тип образца: пробы воды.

Состав

Формула среды HiCrome™ Chromogenic Coliform Agar (CCA) с 1% агара:

Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эффективности.

Триптон — ферментативный гидролизат казеина.

Технические характеристики

Принцип действия и интерпретация результатов

Хромогенный агар HiCrome™ представляет собой селективную среду, рекомендованную ISO для количественного определения Escherichia coli и колиформных бактерий.

Среда содержит три хромогенных субстрата:

• β-D-галактозидаза, вырабатываемая колиформными бактериями, расщепляет 6-хлор-3-индоксил-β-D-галактопиранозид с образованием колоний от розового до красного цвета;
• β-D-глюкуронидаза, вырабатываемая E. coli, расщепляет 5-бром-4-хлор-3-индоксил-β-D-глюкуроновую кислоту;
• IPTG усиливает цветовую реакцию.

Колонии E. coli приобретают тёмно-синюю или фиолетовую окраску вследствие расщепления обоих хромогенных субстратов. Добавление L-триптофана улучшает индольную реакцию и повышает надёжность выявления.

Триптон, пируват натрия и сорбитол обеспечивают азотистые вещества, сбраживаемый углевод и другие необходимые питательные компоненты для роста микроорганизмов. Фосфаты выполняют функцию буферной системы. Формула среды способствует восстановлению и быстрому росту даже сублетально повреждённых колиформных бактерий. Тер ofitol-7 подавляет грамположительные, а также некоторые грамотрицательные бактерии, не относящиеся к колиформным.

Посев среды выполняют методом заливки в чашку или поверхностным нанесением образца на приготовленную среду. Допускается также применение метода мембранной фильтрации.

Для подтверждения наличия E. coli на тёмно-синюю или фиолетовую колонию наносят каплю реактива Ковача. Образование вишнёво-красной окраски указывает на положительную реакцию.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 25,92 г сухой среды, что соответствует массе обезвоженной среды на 1 л, в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Не автоклавируйте среду.
4. Не допускайте перегрева.
5. Охладите раствор до 45–50 °C.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика обработки проб

Мембранная фильтрация

1. Профильтруйте 100 мл образца с использованием мембранного фильтра.
2. Минимальный объём для фильтрации должен составлять 10 мл либо соответствующий объём разбавленной пробы, чтобы обеспечить равномерное распределение бактерий на мембранном фильтре.
3. После фильтрации поместите мембранный фильтр на хромогенный колиформный агар HiCrome™ (CCA), не допуская образования воздушных прослоек под фильтром.
4. Переверните чашку Петри.
5. Инкубируйте при температуре 36 °C ± 2 в течение 21 ± 3 ч.
6. Оцените изменение окраски колоний на мембранном фильтре.

Подтверждение результата

Для подтверждения выполняют биохимические и серологические тесты.

Контроль качества

Внешний вид: однородный, свободно текущий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,0% агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется светло-жёлтый опалесцирующий гель.

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 2,59% масс./об. при 25 °C; pH 6,8 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,60–7,00.

Культуральные характеристики учитывают после инкубации при 36 °C ± 2 в течение 21 ± 3 ч. Восстановление оценивают на триптиказо-соевом агаре (TSA).

* Соответствующие номера WDCM.

Окраску оценивают либо на чашке, либо на мембранном фильтре.

• Название Klebsiella aerogenes ранее использовалось как Enterobacter aerogens.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 15–25 °C.
• Условия