HiMedia M1991AI-100G HiCrome хромогенный колиформный агар с 1% агара

Питательная хромогенная агаризованная среда HiMedia M1991AI-100G HiCrome хромогенный колиформный агар с 1% агара предназначена для выявления Escherichia coli и колиформных бактерий в пробах воды. Среда используется для мембранной фильтрации, посева методом заливки или поверхностного распределения и не подлежит автоклавированию.

Назначение

Среда предназначена для обнаружения и количественного определения Escherichia coli и колиформных бактерий в пробах воды. Состав и критерии эффективности соответствуют требованиям ISO 9308-1:2014; применение среды предусматривает инкубацию при 36 °C ± 2 °C в течение 21 ± 3 ч.

Состав

Формула среды M1991AI — хромогенный колиформный агар HiCrome (CCA) с 1 % агара:

Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2.

№ Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия установленным параметрам эффективности.

№ Триптон — ферментативный перевар казеина.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 25,92 г сухой обезвоженной среды, что соответствует количеству среды на 1 л, в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Не автоклавируйте и не перегревайте среду.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Хромогенный агар HiCrome представляет собой селективную среду, рекомендованную ISO для количественного определения Escherichia coli и колиформных бактерий. В состав входят три хромогенных субстрата.

Фермент β-D-галактозидаза, продуцируемый колиформными бактериями, расщепляет 6-хлор-3-индоксил-β-D-галактопиранозид с образованием колоний от розового до красного цвета. Фермент β-D-глюкуронидаза, продуцируемый E. coli, расщепляет 5-бром-4-хлор-3-индоксил-β-D-глюкуроновую кислоту. Колонии E. coli приобретают тёмно-синюю или фиолетовую окраску вследствие расщепления обоих хромогенов.

Третий хромоген IPTG усиливает цветную реакцию. Добавление L-триптофана улучшает индольную реакцию и повышает надёжность обнаружения.

Триптон, пируват натрия и сорбитол обеспечивают азотистые вещества, сбраживаемые углеводы и другие необходимые для роста питательные компоненты. Фосфаты буферируют среду. Формула среды способствует восстановлению и быстрому росту даже сублетально повреждённых колиформных бактерий. Tergitol-7 подавляет грамположительные, а также некоторые грамотрицательные бактерии, не относящиеся к колиформным.

Посев выполняют методом заливки, поверхностным распределением пробы по приготовленной среде или с использованием мембранной фильтрации. Для подтверждения E. coli на тёмно-синюю или фиолетовую колонию наносят каплю реактива Ковача. Образование вишнёво-красной окраски указывает на положительную реакцию.

Методика исследования проб воды

Фильтрация

1. Профильтруйте 100 мл пробы через мембранный фильтр.
2. Минимальный объём фильтруемой пробы должен составлять 10 мл или соответствующий объём разведения, чтобы обеспечить равномерное распределение бактерий на мембранном фильтре.

Инкубация и дифференциация

1. После фильтрации поместите мембранный фильтр на хромогенный колиформный агар HiCrome (CCA Agar).
2. Убедитесь, что под мембранным фильтром не осталось воздуха.
3. Переверните чашку Петри.
4. Инкубируйте при 36 °C ± 2 °C в течение 21 ± 3 ч.
5. Оцените изменение окраски колоний на мембранном фильтре.

Подтверждение

Для подтверждения проводят биохимические и серологические тесты.

Технические характеристики

Тип образца

Проба воды.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется светло-жёлтый опалесцирующий гель.

Реакция среды

Реакция 2,59%-ного водного раствора при 25 °C: pH 6,8 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 36 °C ± 2 °C в течение 21 ± 3 ч. Восстановление культуры оценивают на триптиказо-соевом агаре (TSA).

* Соответствующие номера WDCM.

# Окраску оценивают на чашке или мембранном фильтре.

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 15–25 °C.
• Условия хранения сухой среды: плотно закрытый контейнер.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрыв флакон, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывайте контейнер.
• Эффективность среды сохраняется при использовании в течение установленного срока годности.

При получении хранить при 15–25 °C.

Меры безопасности

• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• Работать со средой разрешается только обученному персоналу.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Отдельные микроорганизмы отличаются требованиями к условиям роста и могут демонстрировать на среде различные варианты роста.
2. Каждая партия среды проверяется на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). При необходимости выявления микроорганизма, не указанного в COA, пользователю рекомендуется валидировать среду с учётом специфических требований исследования.

Оценка эффективности

Ожидаемые характеристики среды обеспечиваются при применении в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания. При утилизации инфекционных материалов необходимо соблюдать установленные лабораторные процедуры; материалы