Основа агара Миддлбрука 7H10 HiMedia M199-500G (уп/500 гр)

Основа питательной среды Основа агара Миддлбрука 7H10 HiMedia M199-500G (уп/500 гр) — порошковая агаровая основа для микробиологических исследований с конечным pH 6,6 ± 0,2. Основа применяется с глицерином и ростовой добавкой Middlebrook OADC для выделения, культивирования и определения чувствительности к антимикробным препаратам Mycobacterium tuberculosis из клинических образцов мокроты.

Назначение

Среда предназначена для выделения, культивирования и определения чувствительности к антимикробным препаратам Mycobacterium tuberculosis после обогащения глицерином и ростовой добавкой Middlebrook OADC (FD018).

Тип питательной среды: диагностическая
Назначение изделия: основа
Сертификат: ФСЗ 2009/03709
Форма выпуска: порошок
Фасовка: 500 г

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности среды.

Конечный pH при 25 °C: 6,6 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация

Дюбос и Миддлбрук разработали составы, содержащие олеиновую кислоту и альбумин. Эти компоненты защищают микобактерии от токсичных веществ и способствуют росту туберкулёзных бацилл. Основа агара Миддлбрука 7H10 разработана на основе модифицированной агаровой среды с олеиновой кислотой и альбумином; при её применении наблюдается быстрый и обильный рост видов Mycobacterium.

По сравнению с яичными средами, обычно применяемыми для культивирования микобактерий, на агаре 7H10 отмечается меньшее загрязнение посторонней микрофлорой. Среда используется для выделения, культивирования и определения чувствительности M. tuberculosis при добавлении ростовой добавки OADC (FD018) и глицерина.

Среда Миддлбрука содержит неорганические соли, необходимые для роста микобактерий. Цитратная кислота, образующаяся из цитрата натрия, способствует удержанию неорганических катионов в растворе. Глицерин служит источником углерода и энергии.

Ростовая добавка Middlebrook OADC (FD018) содержит олеиновую кислоту, бычий альбумин, хлорид натрия, декстрозу и каталазу:

• олеиновая кислота и другие длинноцепочечные жирные кислоты необходимы для метаболизма микобактерий;
• некоторые свободные жирные кислоты токсичны для микобактерий, однако альбумин связывает эти кислоты и предотвращает их токсическое действие;
• декстроза служит источником энергии;
• каталаза нейтрализует токсичные перекиси;
• малахитовый зелёный частично подавляет рост других бактерий.

Микобактерии являются строгими аэробами, поэтому при инкубации необходимо обеспечить аэробные условия и повышенное содержание CO₂. При деконтаминации образца требуется соблюдать осторожность. Необходимо правильно собирать клинический материал: использовать мокроту, а не слюну. Образцы следует обрабатывать с соблюдением мер, предотвращающих загрязнение.

Тип образца

Тип клинического образца: мокрота.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 9,73 г порошка в 450 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 2,5 мл глицерина.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (ориентировочно ≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 10 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте содержимое одного флакона ростовой добавки Middlebrook OADC (FD018).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные пробирки или контейнеры с завинчивающимися крышками.

Приготовленную среду до и после инокуляции необходимо хранить в темноте.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно действующим лабораторным процедурам и установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Материал, контактировавший с клиническим образцом, должен быть обеззаражен и утилизирован в соответствии с действующими методами работы микробиологической лаборатории.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

• Приготовленную среду необходимо хранить в темноте до и после инокуляции.
• При инкубации следует обеспечить аэробные условия и повышенное содержание CO₂, поскольку микобактерии являются строгими аэробами.
• Для снижения риска загрязнения необходимо использовать корректно собранную мокроту, а не слюну, и тщательно обрабатывать образцы.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид порошка: однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до светло-зелёного цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета с зеленоватым оттенком, формирующийся в чашках Петри.

Реакция и pH

Реакция: реакция 1,95 % масс./об. водного раствора с глицерином при 25 °C.

pH: 6,40–6,80.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления ростовой добавки Middlebrook OADC (FD018) и глицерина, инкубации при 35–37 °C в течение 2–4 недель.

Ожидаемые характеристики среды обеспечиваются при приготовлении по инструкции на этикетке, использовании в пределах срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Хранение и срок годности

• Порошок хранить при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Приготовленную среду хранить при 2–8 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрывать и хранить в сухом состоянии, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности продукта.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования контейнер необходимо плотно закрывать.
• Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение указанного срока годности.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо безопасно утилизировать автоклавированием и/или сжиганием.

При утилизации инфекционных материалов следует соблюдать установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, необходимо обеззараживать и утилизировать в соответствии с действующими методами работы лаборатории.

Технические характеристики

Ростовая добавка и совместимые компоненты

Для выделения, культивирования и определения чувствительности Mycobacterium tuberculosis основу применяют с:

• глицерином — 2,5 мл на 450 мл очищенной или дистиллированной воды при приготовлении;
• одной ампулой или флаконом ростовой добавки Middlebrook OADC (FD018) на приготовленный объём среды.

Комплект поставки

• Основа агара Миддлбрука 7H10 HiMedia M199-500G, 500 г, порошок.

Контрольные организмы

Для оценки культуральных характеристик применяются:

• Mycobacterium fortuitum ATCC 6841