HiMedia M1972-100G RPMI 1640 агар с MOPS и 2% глюкозы

Питательная агаризованная среда HiMedia M1972-100G RPMI 1640 агар с MOPS и 2% глюкозы предназначена для определения чувствительности микроорганизмов к противогрибковым препаратам. Среда применяется для тестирования чистых культур клинических изолятов, при этом плотность инокулюма и условия хранения дисков могут влиять на результаты определения минимальной подавляющей концентрации.

Назначение

RPMI 1640 агар с MOPS и 2% глюкозы без бикарбоната натрия используется для определения чувствительности микроорганизмов к противогрибковым препаратам.

Среда предназначена для работы с клиническими образцами, содержащими изолированные микроорганизмы из мочи, кала, крови и других материалов.

Состав

Среда состоит из двух компонентов: части A и части B. Расчётный состав приведён в граммах на литр.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,1.

Принцип действия и интерпретация

Среда RPMI-1640 разработана Moore и соавторами в Институте онкологических исследований имени Розуэлла Парка. Формула основана на серии сред RPMI-1630 с использованием бикарбонатной буферной системы и изменённым содержанием аминокислот и витаминов.

За последние два десятилетия увеличилась частота инвазивных грибковых инфекций. Из-за опасного для жизни характера таких инфекций и сообщений о лекарственной устойчивости определение чувствительности дрожжевых патогенов имеет существенное значение.

CLSI опубликовал референсный метод определения чувствительности дрожжей к противогрибковым препаратам методом серийного разведения в бульоне. Среда RPMI-1640 агар также применяется при использовании метода градиентных полосок для исследования видов Candida, непосредственно выделенных из колоний, выращенных на неселективных средах.

RPMI-1640 агар может использоваться для определения значений минимальной подавляющей концентрации (MIC) различных противогрибковых препаратов. Аминокислоты, витамины и соли обеспечивают микроорганизмы необходимыми питательными веществами. Глюкоза является источником углеводов. MOPS выполняет функцию буферной системы среды. Агар используется в качестве отверждающего компонента.

Методика приготовления

Приготовление части A

1. Суспендируйте 42,91 г части A в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Осторожно перемешивайте до полного растворения среды.
3. Не нагревайте среду.
4. Стерилизуйте среду фильтрованием через стерильный мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм или менее.

Приготовление части B и объединение компонентов

1. Суспендируйте 35 г части B в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Тщательно перемешайте.
3. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует примерно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите часть B до 45–50 °C.
6. В асептических условиях добавьте в часть B стерилизованную фильтрованием часть A.
7. Тщательно перемешайте перед разливом в стерильные чашки Петри.

Рабочие характеристики партии протестированы и стандартизированы в соответствии с актуальным документом CLSI, ранее обозначавшимся как NCCLS.

Тип образца

Клинические образцы: изолированные микроорганизмы из мочи, кала, крови и других клинических материалов.

Сбор и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами и лабораторными процедурами.

Ограничения применения

1. Среда рекомендована только для определения чувствительности чистых культур.
2. Плотность инокулюма может влиять на размер зоны задержки роста: слишком плотный инокулюм может привести к уменьшению зон, а слишком малое количество инокулюма — к увеличению зон.
3. При определении чувствительности к противогрибковым препаратам с использованием дисков необходимо обеспечить правильное хранение дисков, поскольку условия хранения могут влиять на активность препарата.
4. В определённых обстоятельствах результаты определения чувствительности антибиотиков in vitro могут не совпадать с результатами in vivo.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения части A: 2–8 °C.
• Температура хранения части B: 10–30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Условия хранения порошка: в плотно закрытой ёмкости, в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После открытия: хранить продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности продукта.
• После использования: плотно закрывать контейнер.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение указанного срока годности и при соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Меры безопасности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Информацию по безопасности при необходимости следует уточнять в соответствующих паспортах безопасности.

Контроль качества

Внешний вид и цвет порошка

• Часть A: однородный, легко пересыпающийся порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Часть B: однородный, легко пересыпающийся порошок от почти белого до кремового цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель желтовато-зелёного цвета.

Реакция и pH

• Реакция: раствор 4,29 г части A в 50 мл водного раствора при 25 °C.
• pH раствора: 7,0 ± 0,1.
• Диапазон pH: 6,90–7,10.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации грибковых культур при 30–35 °C в течение 24–48 ч.

При контрольном испытании Candida krusei ATCC 6258 значение MIC может быть получено или не получено, поскольку максимальная