Основа агара Миддлбрука 7H10, специальная HiMedia M196-500G (уп/500 гр)

Питательная среда «Основа агара Миддлбрука 7H10, специальная HiMedia M196-500G (уп/500 гр)» — селективная агаровая основа для микробиологических исследований с конечным pH 6,6 ± 0,2. Среда с добавлением OADC и глицерола применяется для выделения, культивирования и определения чувствительности к антимикробным препаратам Mycobacterium tuberculosis из клинических образцов мокроты.

Назначение

Основа агара Миддлбрука 7H10, специальная, рекомендуется для выделения, культивирования и определения чувствительности к антимикробным препаратам Mycobacterium tuberculosis.

Для приготовления готовой среды используют ростовую добавку OADC для микобактерий FD018 и глицерол.

• Тип питательной среды: элективный
• Тип продукта: стандартный
• Назначение изделия: основа
• Сертификат: ФСЗ 2009/03709
• Форма выпуска: порошок
• Фасовка: 500 г
• Тип упаковки: ПНД (полиэтилен высокой плотности)
• Происхождение: животное

Состав

Состав на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных эксплуатационных характеристик.

• Конечный pH при 25 °C: 6,6 ± 0,2

Принцип действия и интерпретация

Твёрдые среды для культивирования микобактерий подразделяются на яичные, например среда Левенштейна—Йенсена, и агаровые, к которым относятся среды Миддлбрука.

Дюбос и Миддлбрук разработали составы, содержащие олеиновую кислоту и альбумин. Эти компоненты защищают Mycobacterium от токсичных веществ и способствуют росту туберкулёзных бацилл.

Основа агара Миддлбрука 7H10 была разработана на основе состава Миддлбрука. Миддлбрук, Кон и соавторы преобразовали исходную олеиново-альбуминовую агаровую среду и наблюдали быстрый обильный рост видов Mycobacterium; полученную среду обозначили как 7H10. Кубика и Дай сообщили о меньшем количестве контаминаций на агаре 7H10 по сравнению с яичными средами, обычно применяемыми для культивирования микобактерий.

Специальная основа агара Миддлбрука 7H10 разработана Миддлбруком и Коном. После обогащения ростовой добавкой OADC FD018 и глицеролом среда рекомендуется для культивирования M. tuberculosis и определения чувствительности к антимикробным препаратам.

Компоненты среды выполняют следующие функции:

• неорганические соли поддерживают рост микобактерий;
• цитрат натрия образует лимонную кислоту, которая способствует удержанию неорганических катионов в растворе;
• глицерол служит источником углерода и энергии;
• ростовая добавка OADC FD018 содержит олеиновую кислоту, бычий альбумин, хлорид натрия, декстрозу и каталазу;
• олеиновая кислота и другие длинноцепочечные жирные кислоты необходимы для метаболизма микобактерий;
• некоторые свободные жирные кислоты токсичны для микобактерий, однако альбумин связывает эти жирные кислоты и предотвращает их токсическое действие;
• декстроза служит источником энергии;
• каталаза нейтрализует токсичные пероксиды;
• малахитовый зелёный частично подавляет рост других бактерий.

Микобактерии являются строгими аэробами, поэтому при инкубации необходимо обеспечить аэробные условия и повышенное содержание CO₂. При обеззараживании образца следует соблюдать осторожность. Необходимо обеспечить правильный сбор материала: используют мокроту, а не слюну. Образцы следует обрабатывать с соблюдением мер, предотвращающих контаминацию.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 9,75 г порошка в 450 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 2,5 мл глицерола.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду по 180 мл в колбы.
4. Стерилизуйте при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует примерно 0,103 МПа или 1,03 бар, при 121 °C в течение 10 мин.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. В асептических условиях добавьте 50 мл ростовой добавки OADC для микобактерий FD018.
7. Тщательно перемешайте.
8. Разлейте среду в стерильные пробирки или контейнеры с завинчивающимися крышками.

Подготовленную среду до и после инокуляции следует хранить в темноте.

Тип образца

• Клинический образец: мокрота

Сбор и обработка образцов

При работе с клиническими образцами применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными лабораторными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте надлежащие правила микробиологической лабораторной практики.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Из-за различий в составе питательных веществ некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост.
2. Отдельные микроорганизмы различаются по требованиям к условиям роста и могут давать неодинаковые характеристики роста на этой среде.
3. Каждая серия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа. При использовании среды для конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, рекомендуется провести валидацию с учётом индивидуальных требований пользователя.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, сыпучий порошок от светло-жёлтого до светло-зелёного цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета с зеленоватым оттенком.

Реакция

Реакция 1,95%-ного водного раствора с содержанием глицерола 0,5 % при 25 °C:

• pH: 6,6 ± 0,2

Диапазон pH

• pH: 6,40–6,80

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 2–4 недель на среде с добавлением ростовой добавки OADC для микобактерий FD018 и глицерола.

Условия хранения и срок годности

• Хранение сухого продукта: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение приготовленной среды: при 2–8 °C.