HiMedia M1924-500G Основа быстрого дифференциального HiCrome агара для L. monocytogenes

Питательная дифференциальная среда HiMedia M1924-500G Основа быстрого дифференциального HiCrome агара для L. monocytogenes производства HiMedia в виде порошка предназначена для быстрого выявления Listeria monocytogenes по ферментации рамнозы и активности PIPLC. Основа применяется для анализа пищевых образцов, дифференциации Listeria monocytogenes от других видов Listeria и имеет конечный pH 7,4 ± 0,2 при 25 °C.

Назначение

Основа предназначена для быстрого выявления и дифференциации Listeria monocytogenes от других видов Listeria по ферментации рамнозы и активности фосфатидилинозитол-специфичной фосфолипазы C (PIPLC).

Тип образца: пищевые продукты.

Состав

Состав, г/л:

Конечный pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Принцип дифференциации

Listeria monocytogenes — грамположительный возбудитель пищевых инфекций человека, способный вызывать тяжёлые инфекции у беременных, включая выкидыш, мертворождение и рождение ребёнка с неонатальным листериозом, а также менингит или первичную бактериемию у взрослых и детей. Патогенность Listeria ivanovii для человека остаётся неопределённой.

L. monocytogenes и L. innocua обладают сходными биохимическими свойствами и не могут быть дифференцированы на традиционных средах PALCAM и Oxford. Среда основана на специфическом хромогенном выявлении активности β-глюкозидазы, ферментации рамнозы и активности PIPLC.

Виды Listeria гидролизуют очищенный хромогенный субстрат в составе среды, в результате чего формируются колонии синего цвета. Активность β-глюкозидазы специфична для видов Listeria: другие микроорганизмы не используют хромогенный субстрат и формируют белые колонии.

Дифференциация видов Listeria основана на ферментации рамнозы и активности PIPLC:

• колонии L. monocytogenes имеют голубовато-зелёную окраску с жёлтым ореолом, что соответствует положительной реакции на ферментацию рамнозы;
• колонии L. ivanovii имеют голубовато-зелёную окраску без жёлтого ореола, что соответствует отрицательной реакции на ферментацию рамнозы.

Различие между L. monocytogenes и L. innocua определяется активностью PIPLC. Фермент фосфолипаза C гидролизует очищенный субстрат FD214, добавленный в среду, и формирует непрозрачный ореол вокруг колоний Listeria monocytogenes. L. ivanovii также проявляет активность PIPLC, однако отсутствие ферментации рамнозы позволяет легко отличить этот вид от L. monocytogenes.

Специальный пептон, триптон и соевый пептон обеспечивают среду азотистыми и углеродистыми соединениями, аминокислотами с длинной цепью, витаминами группы B и другими необходимыми питательными веществами. Рамноза является ферментируемым углеводом, феноловый красный — индикатором. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие. Добавленные хлорид лития и селективная добавка CA Selective Supplement FD181 подавляют рост большинства грамположительных и грамотрицательных бактерий, дрожжей и плесневых грибов.

Фосфолипаза C гидролизует очищенный субстрат FD214, добавленный в среду, что приводит к образованию непрозрачного ореола вокруг колоний Listeria monocytogenes и демонстрирует активность PIPLC.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 35,14 г порошка в 470 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте стерильное содержимое одного флакона обогатительной добавки LP Supplement 1 (FD214).
6. Добавьте стерильно восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки CA Selective Supplement (FD181).
7. Тщательно перемешайте среду и разлейте в стерильные чашки Петри.

Пробоотбор и обращение с образцами

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид и физические свойства

• Внешний вид: однородный порошок от светло-жёлтого до розового цвета, свободно пересыпающийся.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется гель красного цвета с опалесценцией.
• Реакция: реакция 7,03 % масс./об. водного раствора при 25 °C.
• pH: 7,20–7,60.
• Конечный pH: 7,4 ± 0,2 при 25 °C.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч с добавлением селективной добавки CA Selective Supplement FD181 и обогатительной добавки LP Enrichment Supplement 1 FD214.

* Соответствующие номера WDCM.

Bacillus spizizenii ранее обозначался как Bacillus subtilis subsp. spizizenii.

Ограничения метода

1. Отдельные микроорганизмы различаются по требованиям к росту и могут демонстрировать неодинаковые характеристики роста на среде.
2. Возможны небольшие вариации окраски в зависимости от использования субстрата микроорганизмами.
3. Каждая партия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). Для любого конкретного микроорганизма, не указанного в COA, рекомендуется валидировать среду с учётом специфических требований пользователя.
4. Для подтверждения результата необходимо провести дополнительные биохимические тесты.

Условия результативности

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты