HiMedia M1924-100G Основа быстрого дифференциального HiCrome агара для L. monocytogenes

Основа питательной среды HiMedia M1924-100G Основа быстрого дифференциального HiCrome агара для L. monocytogenes производства HiMedia предназначена для быстрого выявления и дифференциации Listeria monocytogenes по ферментации рамнозы и активности PIPLC. Среда применяется для анализа пищевых образцов и содержит хромогенную систему, обеспечивающую окрашивание колоний Listeria в голубовато-зелёный цвет.

Назначение

Основа предназначена для быстрого выявления и дифференциации Listeria monocytogenes от других видов Listeria по ферментации рамнозы и активности фосфатидилинозитол-специфической фосфолипазы C (PIPLC).

Область применения

Тип исследуемого образца

• Пищевые продукты и другие пищевые образцы.

Пробоотбор и обращение с образцами

Для пищевых образцов применяют подходящие методы отбора и обработки проб в соответствии с действующими лабораторными процедурами. После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Состав

Состав среды на 1 л:

Конечный pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности среды.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 35,14 г порошка в 470 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте стерильное содержимое 1 флакона обогатительной добавки LP Enrichment Supplement 1 (FD214) и стерильно восстановленное содержимое 1 флакона селективной добавки CA Selective Supplement (FD181).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип измерения и интерпретация

Listeria monocytogenes — грамположительный пищевой патоген человека, вызывающий тяжёлые инфекции у беременных женщин, которые могут приводить к самопроизвольному аборту, мертворождению, рождению ребёнка с неонатальным листериозом и менингитом, а также к первичной бактериемии у взрослых и детей. Патогенность Listeria ivanovii для человека считается неопределённой.

L. monocytogenes и L. innocua обладают сходными биохимическими свойствами, поэтому не могут быть дифференцированы на традиционных средах PALCAM и Oxford. Принцип действия среды основан на специфическом хромогенном выявлении активности β-глюкозидазы, ферментации рамнозы и активности PIPLC.

Виды Listeria гидролизуют очищенный хромогенный субстрат, содержащийся в среде, с образованием колоний голубого цвета. Поскольку активность β-глюкозидазы специфична для видов Listeria, другие микроорганизмы не используют хромогенный субстрат и формируют белые колонии.

Дифференциация видов Listeria основана на ферментации рамнозы и активности PIPLC:

• колонии L. monocytogenes имеют голубовато-зелёную окраску с жёлтым ореолом, что соответствует положительной реакции на рамнозу;
• колонии L. ivanovii имеют голубовато-зелёную окраску без жёлтого ореола, что соответствует отрицательной реакции на рамнозу.

Дифференциация L. monocytogenes и L. innocua основана на активности фосфатидилинозитол-специфической фосфолипазы C. Фермент фосфолипаза C гидролизует очищенный субстрат FD214, добавленный в среду, в результате чего вокруг колоний Listeria monocytogenes, проявляющих активность PIPLC, образуется непрозрачный ореол.

L. ivanovii также проявляет активность PIPLC, однако не ферментирует рамнозу, поэтому легко отличается от L. monocytogenes по отсутствию жёлтого ореола.

Специальный пептон, триптон и соевый пептон обеспечивают среду азотистыми и углеродистыми соединениями, длинноцепочечными аминокислотами, витаминами группы B и другими необходимыми питательными веществами для роста. Рамноза является ферментируемым углеводом, а феноловый красный — индикатором. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие.

Добавленные хлорид лития и селективная добавка CA Selective Supplement (FD181) ингибируют рост большинства грамположительных и грамотрицательных бактерий, дрожжей и плесневых грибов. Фермент фосфолипаза C гидролизует очищенный субстрат FD214, добавленный в среду, с образованием непрозрачного ореола вокруг колоний Listeria monocytogenes, демонстрирующих активность PIPLC.

По сравнению с традиционными средами PALCAM и Oxford, которые не позволяют надёжно дифференцировать L. monocytogenes и L. innocua из-за сходства их биохимических свойств, среда использует сочетание хромогенного выявления β-глюкозидазы, ферментации рамнозы и активности PIPLC.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Модель/артикул: M1924-100G
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Тип продукта: HiCrome™
• Физическая форма: порошок
• Происхождение: животное
• Масса: 100 г
• Тип упаковки: HDPE (полиэтилен высокой плотности)
• Конечный pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,20–7,60
• Состав приготовленной среды: 7,03 % масс./об. водного раствора при 25 °C
• Цвет и состояние порошка: однородный, сыпучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: красный опалесцирующий гель в чашках Петри
• Температура инкубации при контроле культуральных характеристик: 35–37 °C
• Время инкубации при контроле культуральных характеристик: 24–48 ч
• Добавки для контроля культуральных характеристик: CA Selective Supplement (FD181) и LP Enrichment Supplement 1 (FD214)

Контроль культуральных характеристик

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч на среде с добавлением селективной добавки CA Selective Supplement (FD181) и обогатительной добавки LP Enrichment Supplement 1 (FD214).