HiMedia M1878-100G Агар для Vibrio vulnificus (VVA)

Питательная агаровая среда HiMedia M1878-100G Агар для Vibrio vulnificus (VVA) производства HiMedia предназначена для идентификации Vibrio vulnificus в пищевых и молочных образцах; конечный pH среды составляет 8,20 ± 0,2. Среда применяется для последующего выявления типичных жёлтых непрозрачных колоний размером 1–2 мм, при этом для полной идентификации требуются дополнительные биохимические и серологические тесты.

Назначение

Агар Vibrio vulnificus (VVA) рекомендован для идентификации бактерий рода Vibrio в соответствии с Бактериологическим аналитическим руководством FDA, 1998, и используется для идентификации Vibrio vulnificus в пищевых образцах методом олигонуклеотидного анализа.

Тип образцов: пищевые и молочные образцы.

Назначение изделия: агар.

Масса: 100 г.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Конечный pH при 25 °C: 8,20 ± 0,2.

Происхождение компонентов: животное.

Физическая форма: порошок.

Тип продукта: стандартный.

Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE).

Принцип действия и интерпретация результатов

Vibrio vulnificus является одной из причин летальных исходов после употребления морепродуктов или инфицирования ран, возникших в морской среде.

Бактерии рода Vibrio в целом являются алкалофильными и хорошо растут в присутствии относительно высоких концентраций солей желчных кислот. Поэтому для их выделения и идентификации применяют среды с щелочным значением pH.

Для подтверждения принадлежности к видам рода Vibrio используют физические, биохимические и серологические методы. На агаре TCBS V. vulnificus сходен с V. parahaemolyticus, однако виды можно различать по нескольким биохимическим реакциям, включая активность β-галактозидазы.

Для специфической идентификации вида также рекомендованы олигонуклеотидные методы. Схема олигонуклеотидного анализа включает методы наиболее вероятного числа (MPN) и прямого посева с последующей гибридизацией с ДНК-зондами для идентификации колоний.

Для выделения бактерий рода Vibrio наиболее часто применяются следующие среды:

• основа агара CPC, M1241F;
• щелочная пептонная вода, M618;
• агар TCBS, M870S.

В среде VVA:

• пептон обеспечивает среду необходимыми азотсодержащими соединениями;
• целлобиоза служит сбраживаемым источником углерода;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• бромтимоловый синий является индикаторным красителем;
• агар выполняет функцию отвердителя.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 85,06 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Методика подготовки и анализа образцов

1. Приготовьте разведение образца 1:10 в фосфатно-буферном физиологическом растворе (PBS), используемом в качестве разбавляющей воды.
2. Гомогенизируйте образец в течение 60 с.
3. При необходимости приготовьте соответствующие последовательные разведения образца.
4. Перенесите по 0,1 мл соответствующих разведений на промаркированные чашки с агаром VVA.
5. Инкубируйте чашки в течение 18–24 ч при температуре 35 ± 2 °C.
6. Оцените характерные колонии V. vulnificus: относительно крупные жёлтые непрозрачные колонии размером 1–2 мм, имеющие вид «жареного яйца».
7. Выделенные колонии можно использовать для количественного определения V. vulnificus методом ДНК-зонда.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Контроль качества

Внешний вид: однородный, свободно текучий порошок от кремового до светло-зелёного цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 2,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель зелёного цвета.

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 8,51 % масс./об. при 25 °C.

pH: 8,00–8,40.

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Тип образца и обращение с ним

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Хранение и срок годности

• Температура хранения закрытого контейнера с порошком: 10–30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Хранить в плотно закрытом контейнере.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия плотно закрывать флакон и хранить продукт в сухом состоянии.
• Из-за гигроскопичности продукта нарушение условий хранения может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования плотно закрывать контейнер.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение установленного срока годности.

Меры предосторожности

Перед вскрытием контейнера прочитайте маркировку.

При работе с образцами и культурами:

• используйте защитные перчатки;
• надевайте защитную одежду;
• применяйте средства защиты глаз;
• используйте средства защиты лица;
• соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики;
• соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с действующими руководствами;
• при необходимости обращайтесь к паспортам безопасности соответствующих материалов.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

Инфекционные материалы следует утилизировать в соответствии с установленными лабораторными процедурами. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, необходимо обеззараживать и утилизировать согласно действующим методикам лабораторной работы.

Ограничения применения

1. Некоторые изоляты могут демонстрировать менее интенсивный рост из-за различий в пищевых потребностях.
2. Для полной идентификации необходимо провести дополнительные биохимические и серологические тесты.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Наименование: Агар для Vibrio vulnificus (VVA)
• Артикул: M1878-100G
• Назначение: идентификация Vibrio vulnificus в пищевых и молочных образцах
• Метод анализа: олигонуклеотидный анализ с возможной последующей идентификацией колоний ДНК-зондом
• Физическая форма: порошок
• Масса: 100 г
• Тип продукта: стандартный
• Материал упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Температура приготовления перед разливом: 45–50 °C
• Температура инкубации: 35 ± 2 °C
• Продолжительность инкубации: 18–24 ч
• Конечный pH при 25 °C: 8,20 ± 0,2
• Диапазон pH: 8,00–8,40
• Температура хранения порошка: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C

Техническое отличие методики

В отличие от общего выделения бактерий рода Vibrio на агаре TCBS, среда VVA предназначена для идентификации Vibrio vulnificus по характерным жёлтым непрозрачным колониям с последующим подтверждением биохимическими, серологическими или олигонуклеотидными методами.